背景^[1-3]

MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系是從一名患有急性單核細(xì)胞白血病的1歲小男孩的外周血中分離得到的，自1980年建系以來，MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系細(xì)胞被廣泛用于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞相關(guān)的機(jī)制、信號(hào)通路以及營養(yǎng)和藥物運(yùn)輸?shù)妊芯恐小?/p>

MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系

MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1）復(fù)蘇MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為類；

1.細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

MONO-MAC-6人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系可以用于高血脂致大鼠心肌微血管損傷和心肌缺血性改變及與備解素關(guān)系的研究

動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)也是一個(gè)炎癥性疾病,是單核/巨噬細(xì)胞、補(bǔ)體和T-淋巴細(xì)胞的活化作用誘導(dǎo)慢性炎癥進(jìn)展的結(jié)果。補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體體液防御機(jī)制的一個(gè)組成部分,也是一個(gè)炎癥過程的初級(jí)調(diào)節(jié)介質(zhì),近十年來已有較多的新證據(jù)表明,補(bǔ)體活化作用在AS損傷的起始階段和進(jìn)展階段均起著重要作用。補(bǔ)體系統(tǒng)通過經(jīng)典途經(jīng)、植物凝集素途經(jīng)或旁路途經(jīng)激活,其中旁路途經(jīng)是通過微生物表面和6個(gè)血漿糖蛋白之間的相互作用激活,備解素(Properdin,P因子)是旁路途經(jīng)的正性調(diào)節(jié)劑,它作為環(huán)聚合物(如二聚體、三聚體、四聚體等)循環(huán)在血清中,通過結(jié)合在C3和C5轉(zhuǎn)化酶復(fù)合物(C3bBb和C3bnBb)上而加強(qiáng)其穩(wěn)定性。

盡管備解素在血漿中的濃度范圍達(dá)到4～6μg/ml,但其生理學(xué)來源還不清楚。單核細(xì)胞、T-淋巴細(xì)胞和骨髓源性細(xì)胞系(如HL-60,U-937,Mono Mac 6等)可以合成備解素,但不可能產(chǎn)生顯著的血漿水平,這是因?yàn)閱魏思?xì)胞產(chǎn)生備解素有賴于血液中有限的數(shù)量,而中性粒細(xì)胞(PMN)由于釋放備解素后會(huì)發(fā)生細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象,故推測(cè)備解素的生成更趨向于在血管、而非單獨(dú)在血液循環(huán)中。血管內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cell,EC)可表達(dá)大量補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)蛋白,然而研究發(fā)現(xiàn),雖然備解素屬于補(bǔ)體成分,但維持在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下的EC中不能檢測(cè)到備解素。

最近,已有報(bào)道剪切力作用下的EC具有合成備解素的能力,而備解素與心肌微血管改變之間的關(guān)系國內(nèi)外尚無報(bào)道,了解備解素的表達(dá)與心肌微血管病變之間的關(guān)系,可能對(duì)于進(jìn)一步探究補(bǔ)體的激活和補(bǔ)體。

參考文獻(xiàn)

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[3]Properdin:Approaching four decades of research.Karen K.Maves;;John M.Weiler.Immunologic Research,1993

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[5]滕麗新.高血脂致大鼠心肌微血管損傷和心肌缺血性改變及與備解素關(guān)系的研究[D].第三軍醫(yī)大學(xué),2005.