背景及概述^[1]

蛋白酶是催化蛋白質(zhì)水解的一類酶，是酶學研究中較早也是最深入的一種酶。重組TEV蛋白酶（GST標簽）是煙草花葉病毒小核體蛋白a催化結(jié)構(gòu)域基因編碼的經(jīng)高度純化的制劑，該酶的生物學功能是在病毒產(chǎn)生過程中將多蛋白體酶解為單一蛋白。和因子Xa、凝血酶相比，TEV酶是識別序列更加嚴格。做為生物工程下游技術(shù)中融合蛋白酶切使用的重要工具酶，TEV酶識別非常一致的7氨基酸序列：E-Xaa-Xaa-Y -Xaa-Q-P1’(G/S)，酶切發(fā)生在Q和P1’之間的肽鍵。最常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸，這樣目標蛋白從融合蛋白的N端釋放，帶自然的N末端或者只多一個氨基酸的蛋白。該產(chǎn)品是經(jīng)過了基因工程改造的蛋白酶，穩(wěn)定性好，在廣泛的溫度范圍具有特異性。本品來源于重組大腸桿菌，經(jīng)過高度純化，比活性達到10,000U/mg。最適酶切溫度是30℃，但在4℃也具有酶活性。rTEV-H帶His標簽，酶切后可方便地通過谷胱甘肽親和柱層析去除。酶切的條件比如：溫度、pH、DTT等可根據(jù)具體蛋白進行優(yōu)化。  

純度

經(jīng)SDS-PAGE電泳分析，大于95％。

活性單位

一個酶活性單位定義為在4℃，pH8.0條件下，12~16小時在酶切反應(yīng)緩沖液中將5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。

推薦酶切條件

融合蛋白                                  0.1mg

重組TEV蛋白酶                           20U

10x酶切緩沖液                            10μl

溫度（℃）                                      4

總體積                                       100μl

時間（小時）                          12~16

10x 酶切緩沖液

500 mM Tris-HCl, pH 8.0

5 mM EDTA

1% Tween-20 (v/v)

10 mM DTT

保存條件

-20℃保存活性保持２年以上。

主要參考資料

[1] 胡學智, & 王俊. (2008). 蛋白酶生產(chǎn)和應(yīng)用的進展 (Doctoral dissertation).