背景[1-3]
獸類嗜衣原體PCR試劑盒是一種專門用于檢測(cè)獸類嗜衣原體的體外診斷試劑。它采用了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，能夠在短時(shí)間內(nèi)快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出獸類嗜衣原體。
獸類嗜衣原體PCR試劑盒的主要成分包括PCR反應(yīng)液、DNA模板、引物、酶等。其中，PCR反應(yīng)液是PCR反應(yīng)的基礎(chǔ)，包含PCR反應(yīng)所需的各種成分，如緩沖液、離子、酶等。DNA模板是含有獸類嗜衣原體特異性基因序列的DNA片段，用于擴(kuò)增出特異性片段。引物是一段與DNA模板特異性結(jié)合的短序列，用于啟動(dòng)PCR反應(yīng)。酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，用于催化DNA合成。
獸類嗜衣原體PCR試劑盒
使用獸類嗜衣原體PCR試劑盒時(shí)，需要將DNA模板、引物和PCR反應(yīng)液混合后進(jìn)行PCR反應(yīng)。在適宜的溫度和條件下，引物與DNA模板特異性結(jié)合，并通過(guò)酶的催化進(jìn)行DNA合成，最終得到大量的特異性DNA片段。通過(guò)凝膠電泳等技術(shù)對(duì)這些片段進(jìn)行檢測(cè)和分析，可以確定是否存在獸類嗜衣原體。
獸類嗜衣原體PCR試劑盒具有高靈敏度、高特異性和高可靠性等特點(diǎn)，適用于對(duì)感染疾病的診斷，如獸類嗜衣原體感染。同時(shí)，它也可以用于研究獸類嗜衣原體的基因組結(jié)構(gòu)和功能，為進(jìn)一步了解該病原體的生物學(xué)特性和流行病學(xué)特征提供幫助。
應(yīng)用[4-5]
獸類嗜衣原體PCR試劑盒可以用于鸚鵡熱嗜衣原體禽鳥株的分離、鑒定與基因分型
優(yōu)化鸚鵡熱嗜衣原體（Chlamydophila psittaci，C.psittaci，Cps）禽鳥株分離鑒定培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)測(cè)序及進(jìn)化樹(shù)分析ompA基因的多態(tài)性，研究Cps的種系發(fā)育史及獲得可靠Cps感染的流行病學(xué)資料，掌握衡陽(yáng)地區(qū)Cps的流行病學(xué)特征，從而為Cps感染的預(yù)防、診斷、治療措施提供依據(jù)。
方法：收集衡陽(yáng)地區(qū)可疑的禽鳥標(biāo)本，利用獸類嗜衣原體PCR試劑盒，提取禽鳥肝組織全基因組DNA，設(shè)計(jì)MOMP特異性引物，PCR擴(kuò)增約264bp的基因片段，用1.7%瓊脂糖凝膠電泳分離。將PCR陽(yáng)性禽鳥標(biāo)本肝組織勻漿液接種到單層敏感細(xì)胞株人喉癌上皮細(xì)胞（Hep-2）細(xì)胞和非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)中培養(yǎng)，免疫熒光染色法（IF）鑒定Cps包涵體，免疫熒光顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞內(nèi)包涵體形態(tài)的變化。按照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)另一對(duì)MOMP特異性引物，PCR擴(kuò)增約1000bp的基因片段，用1.2%瓊脂糖凝膠電泳分離，將陽(yáng)性PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化后送往測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序，同時(shí)從Genebank中獲得Cps各型參考株的ompA基因序列，利用軟件ClustalX2和MEGA3構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析臨床株與各參考株之間的親緣關(guān)系。通過(guò)BLAST分析8例標(biāo)本基因間的相似性。
結(jié)果：通過(guò)PCR擴(kuò)增及測(cè)序的方法從591例禽鳥標(biāo)本（其中鸚鵡425只，鴿子23只及其它類型禽鳥143只）中檢測(cè)到8例陽(yáng)性，其中7例來(lái)源于鸚鵡，染率約為1.64%，1例來(lái)源于相思鳥。鴿子的染率為0%，其它類型禽鳥的染率約為0.69%；8例陽(yáng)性標(biāo)本在Hep-2及Vero細(xì)胞中成功培養(yǎng)出7株，成功率為87.5%；通過(guò)Cps在Hep-2細(xì)胞與Vero細(xì)胞中培養(yǎng)生長(zhǎng)情況的比較，發(fā)現(xiàn)Hep-2細(xì)胞在原代培養(yǎng)時(shí)其胞內(nèi)包涵體形成單位（IFU）數(shù)量大于Vero細(xì)胞，培養(yǎng)三代后免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，Vero細(xì)胞內(nèi)的IFU數(shù)量較Hep-2細(xì)胞大；對(duì)8例陽(yáng)性禽鳥標(biāo)本PCR產(chǎn)物ompA基因序列進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與Cps各型參考株ompA序列進(jìn)行軟件分析，系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示其中7例為A型，另外一例暫未能分型；將8例陽(yáng)性禽鳥標(biāo)本PCR產(chǎn)物ompA基因序列與C.psittaci6BC標(biāo)準(zhǔn)株ompA基因進(jìn)行BLAST分析，Cps6BC與其中7例的相似度在92%～99%之間，另外一例與Cps6BC的相似度僅為58%；將E9的ompA基因與Genebank中其它已知菌株基因進(jìn)行比對(duì)也未能對(duì)其進(jìn)行確定。
結(jié)論：（1）成功分離Cps禽鳥株7株，并完善了Cps陽(yáng)性禽鳥株分離鑒定培養(yǎng)技術(shù)；
（2）衡陽(yáng)地區(qū)Cps可能主要以鸚鵡為其宿主，以基因型A為主要型別，且存在一定的變異。
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