背景^[1-3]

HMO6人小膠質(zhì)細胞系是一種來源于人腦小膠質(zhì)細胞的實驗細胞系，通常用于研究人腦小膠質(zhì)細胞的功能和特性。這種細胞系具有多向分化能力，能夠分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞等神經(jīng)細胞類型。

HMO6人小膠質(zhì)細胞系的保存和應(yīng)用需要使用低溫冷藏和液氮保存的方法，以保持細胞的活性和穩(wěn)定性。同時，為了防止污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變，該細胞系通常需要進行定期的傳代和凍存。

HMO6人小膠質(zhì)細胞系是一種來源于人腦的小膠質(zhì)細胞系。小膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種膠質(zhì)細胞，主要負責(zé)支持和保護神經(jīng)元，并參與神經(jīng)元的修復(fù)和再生。

HMO6人小膠質(zhì)細胞系

HMO6人小膠質(zhì)細胞系的特點包括：

形態(tài)特征：HMO6人小膠質(zhì)細胞呈多角形或長條形，大小約為10-20微米左右。

功能特征：HMO6人小膠質(zhì)細胞具有多種生物學(xué)功能，包括支持和保護神經(jīng)元、參與神經(jīng)元的修復(fù)和再生、分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子等。

純度特征：HMO6人小膠質(zhì)細胞通常具有較高的純度，即沒有其他類型的細胞混雜在其中。這對于后續(xù)的實驗研究非常重要，因為只有純度高的細胞才能保證實驗結(jié)果的準確性和可靠性。

來源特征：HMO6人小膠質(zhì)細胞通常來源于人腦組織，可以通過手術(shù)或穿刺等方式獲取。這些方法相對安全、簡單，并且可以獲得足夠數(shù)量的細胞進行實驗研究。

HMO6人小膠質(zhì)細胞系培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇HMO6人小膠質(zhì)細胞系：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)HMO6人小膠質(zhì)細胞系傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)HMO6人小膠質(zhì)細胞系凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

HMO6人小膠質(zhì)細胞系可以用于利用全外顯子組測序發(fā)現(xiàn)神經(jīng)精神狼瘡致病變異及其致病機制研究

.TNFAIP3(c.1 806delG)的致病機制研究首先,為明確突變蛋白在先證者體內(nèi)的表達情況,采集了先證者及2例正常對照者的PBMCs。Western Blot結(jié)果顯示先證者外周血T細胞及單核細胞中野生型A20蛋白表達低于正常對照者;先證者外周血T細胞及單核細胞中突變型A20蛋白表達高于野生型A20蛋白。其次,通過將構(gòu)建的TNFAIP3(c.1806delG)表達載體及K63連接泛素載體共轉(zhuǎn)染到HEK293T并進行免疫共沉淀實驗,我們證實了突變型A20蛋白的去泛素化功能受損。

為探索TNFAIP3(c.1806delG)對外周血免疫細胞功能的影響,本研究應(yīng)用Western Blot發(fā)現(xiàn)先證者T細胞及單核細胞NF-κB通路蛋白磷酸化水平高于正常對照者,并更容易被TNF-α刺激活化;RT-PCR結(jié)果顯示先證者PBMCs中NF-κB下游炎癥因子相對表達水平明顯高于無神經(jīng)精神癥狀的SLE患者和正常對照者,且在TNF-α刺激后進一步升高。這些結(jié)果表明TNFAIP3(c.1806delG)使外周血免疫細胞NF-κB通路活化并促炎因子分泌增多。最后,本研究對TNFAIP3(c.1806delG)在神經(jīng)免疫中的致病機制進行探索。在模擬血-腦屏障的細胞系中,Western Blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染突變型TNFAIP3載體的HUVEC在受到TNF-α刺激后NF-κB通路明顯激活,緊密連接和粘附連接蛋白表達降低;HMO6人小膠質(zhì)細胞系RT-PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染突變型TNFAIP3載體的NHA受到TNF-α刺激后促炎因子相對表達水平明顯升高。在轉(zhuǎn)染突變型TNFAIP3載體的HMO6人小膠質(zhì)細胞系中,RT-PCR結(jié)果顯示靜息狀態(tài)下促炎因子相對表達水平明顯升高。

這些結(jié)果說明TNEAIP3(c.1806delG)通過影響血-腦屏障通透性及中樞神經(jīng)系統(tǒng)固有免疫細胞的活化狀態(tài)對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮致病作用。創(chuàng)新性和意義本研究在一個表型罕見的NPSLE家系中發(fā)現(xiàn)了TNFAIP3(c.1806delG)這一致病變異,初步探索了它在系統(tǒng)性免疫和神經(jīng)免疫中發(fā)揮的作用,發(fā)現(xiàn)了該突變通過激活外周血和中樞神經(jīng)系統(tǒng)固有免疫細胞、破壞血-腦屏障等多個環(huán)節(jié)導(dǎo)致NPSLE的致病機制,為個體化治療和NPSLE發(fā)病機制研究提供了理論基礎(chǔ)和研究方向。

參考文獻

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