背景^[1-3]

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系是一種用于研究人肺腺癌的細(xì)胞系。這種細(xì)胞系是通過(guò)將人肺腺癌的腫瘤組織進(jìn)行體外培養(yǎng)而獲得的。

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系具有一些獨(dú)特的生物學(xué)特性，例如上皮細(xì)胞樣形態(tài)、貼壁生長(zhǎng)等。這種細(xì)胞系可以用于研究肺腺癌的生物學(xué)特性、藥物篩選和化療藥物敏感性等方面的研究。同時(shí)，CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系還可以用于評(píng)估治療效果和開(kāi)發(fā)新的治療策略。

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系是一種來(lái)源于人類(lèi)肺腺癌的貼壁細(xì)胞系。這種細(xì)胞系通常用于研究肺癌的生物學(xué)特性、藥物篩選和治療等。

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

形態(tài)特征：細(xì)胞呈多邊形或長(zhǎng)方形，大小約為10-30微米。

生長(zhǎng)特性：CL1-5細(xì)胞系在適宜的培養(yǎng)條件下，生長(zhǎng)迅速，增殖能力強(qiáng)。

表達(dá)特征：CL1-5細(xì)胞系表達(dá)多種肺癌相關(guān)基因和蛋白，如EGFR、KRAS、ALK等。

藥物敏感性：CL1-5細(xì)胞系對(duì)多種抗腫瘤藥物敏感，如紫杉醇、順鉑、吉非替尼等。

CL1-5細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于肺癌研究，包括肺癌的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療等方面。同時(shí)，由于其易于培養(yǎng)和操作，也被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和藥物篩選等領(lǐng)域。

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系可以用于低氧腫瘤微環(huán)境通過(guò)Akt-PDK1-YKL40通路誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌侵襲性生長(zhǎng)和血管生成

研究旨在闡明低氧誘導(dǎo)線粒體中Akt2-PDK1通路調(diào)控YKL-40在肺癌侵襲性生長(zhǎng)和血管新生中的作用,為臨床上肺癌的治療提供新的靶點(diǎn)和思路。

實(shí)驗(yàn)方法1、比較強(qiáng)侵襲性CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系在常氧和低氧環(huán)境培養(yǎng)下,線粒體中Akt2和PDK1的富集和磷酸化水平,細(xì)胞內(nèi)HIF-1α,YKL-40,VEGF,TGF-β等蛋白的表達(dá)和分泌。

2、構(gòu)建Akt2 sh RNA、YKL-40過(guò)表達(dá)慢病毒載體,轉(zhuǎn)染CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系,比較Akt2干擾和/或YKL-40過(guò)表達(dá)對(duì)CL1-5細(xì)胞中PDK1磷酸化,YKL-40,VEGF,TGF-β等蛋白的表達(dá)和分泌的影響;通過(guò)CCK8,Transwell實(shí)驗(yàn)和成管能力檢測(cè)等方法檢測(cè)細(xì)胞活性、遷移、侵襲和血管新生能力。

3、將上述處理細(xì)胞系分別構(gòu)建裸鼠皮下荷瘤模型,觀察Akt2干擾和/或YKL-40過(guò)表達(dá)的CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞的成瘤能力。

4、在第32天收集各組腫瘤組織,通過(guò)免疫印跡檢測(cè)小鼠腫瘤中Akt2和PDK1的富集和磷酸化水平,YKL-40,VEGF,TGF-β等蛋白的表達(dá),通過(guò)免疫組化比較各組腫瘤細(xì)胞的增殖活性和血管生成能力。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、低氧處理CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞能明顯增加線粒體中Akt2、PDK1的磷酸化水平,細(xì)胞內(nèi)p-Smad3、YKL-40和HIF-1α蛋白表達(dá)增加,細(xì)胞TGF-β、YKL-40、VEGF的分泌增加。

2、CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞轉(zhuǎn)染Akt2 sh RNA載體,并在低氧環(huán)境下處理24 h,Akt2、p-Akt2、YKL-40、p-Smad3、HIF-1α蛋白、N-cadherin和Vimentin表達(dá)均明顯降低,E-cadherin蛋白表達(dá)增加。經(jīng)過(guò)YKL-40過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞YKL-40、N-cadherin、Vimentin蛋白明顯增加,而E-cadherin蛋白表達(dá)卻減少,Akt2和p-Akt2、p-Smad3、HIF-1α蛋白則無(wú)明顯改變。收集上清Akt2 sh RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞因子分泌降低,經(jīng)過(guò)YKL-40過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞TGF-β、YKL-40、VEGF分泌增加。

3、低氧條件下Akt2干擾后,抑制了CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和小管生成;而YLK-40過(guò)表達(dá)能促進(jìn)CL1-5細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和小管生成。

4、小鼠皮下注射各組處理的CL1-5人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞,Akt2 sh RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射小鼠腫瘤增長(zhǎng)速度明顯小于對(duì)照組,而經(jīng)過(guò)YKL-40過(guò)表達(dá)病毒感染的Akt2 sh RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射小鼠腫瘤體積明顯增大。第32天稱量小鼠腫瘤,Akt2 sh RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射的小鼠腫瘤的重量明顯小于對(duì)照組,而經(jīng)過(guò)YKL-40過(guò)表達(dá)病毒感染的Akt2 sh RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射的小鼠腫瘤重量明顯增加。

參考文獻(xiàn)

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