背景^[1-3]

KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系是一種來(lái)源于人慢性髓性白血病的細(xì)胞系。它是一種常用的實(shí)驗(yàn)材料，被廣泛用于研究腫瘤生物學(xué)、藥物篩選和治療策略等領(lǐng)域。

KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

高度增殖：KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系具有快速增殖的能力，可以在體外培養(yǎng)條件下快速生長(zhǎng)。

多藥耐藥性：KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系對(duì)多種化療藥物表現(xiàn)出耐藥性，這使得它成為研究腫瘤耐藥機(jī)制的重要模型。

可移植性：KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系可以通過(guò)移植到小鼠體內(nèi)來(lái)研究腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況。

KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系是一種來(lái)源于人類(lèi)慢性髓原白血病的細(xì)胞系，通常用于研究慢性髓原白血病的生物學(xué)特性和治療機(jī)制。這些細(xì)胞系具有特定的形態(tài)和生物學(xué)特性，如細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等，可以用于研究慢性髓原白血病的發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和治療策略等方面的研究。

KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系

KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1)復(fù)蘇KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系可以用于乳香揮發(fā)油抗腫瘤的作用機(jī)制研究

探討乳香揮發(fā)油及其脂質(zhì)體和3-Keto-tirucall-8,24-dien-21-oicacid(KTDA)體外抑制腫瘤細(xì)胞(人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、人肝癌細(xì)胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系、人宮頸癌細(xì)胞系Hela、人舌癌細(xì)胞系Tca 8113)增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用,旨在闡明它們抗腫瘤的可能作用機(jī)制。

方法:使用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法觀察乳香揮發(fā)油及其脂質(zhì)體和KTDA對(duì)5種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用;通過(guò)吖啶橙染色,觀察5種腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;使用瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞DNA降解的影響。利用流式細(xì)胞術(shù)分析乳香揮發(fā)油誘導(dǎo)SMMC—7721凋亡的凋亡率及對(duì)細(xì)胞周期的影響;應(yīng)用間接免疫熒光法觀察乳香揮發(fā)油誘導(dǎo)凋亡調(diào)控基因Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)變化。

結(jié)果:1.乳香揮發(fā)油濃度為700、70、7、0.7、0.07 ug.mL-1,作用24 h時(shí),能抑制SMMC—7721細(xì)胞的生長(zhǎng),并呈濃度依賴(lài)性。在濃度為70 ug.mL-1時(shí),作用48h和72h,電泳結(jié)果顯示了DNA梯狀條帶:72h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)到凋亡峰,且細(xì)胞被阻滯于G1期。間接免疫熒光法的結(jié)果表明,促凋亡蛋白Bax的表達(dá)增強(qiáng),抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)無(wú)明顯變化。

2.乳香揮發(fā)油濃度為700、70、7 ug.mL-1,脂質(zhì)體含揮發(fā)油濃度為143、14.3、1.43 ug.mL-1,對(duì)比實(shí)驗(yàn),作用72 h時(shí),能抑制人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、人肝癌細(xì)胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系、人宮頸癌細(xì)胞系Hela、人舌癌細(xì)胞系Tca 8113的生長(zhǎng),并呈濃度依賴(lài)性。當(dāng)乳香揮發(fā)油濃度為70 ug.mL-1、脂質(zhì)體濃度為14.3 ug.mL-1,作用72 h后,熒光顯微鏡下觀察到凋亡小體,電泳結(jié)果顯示典型的DNA梯狀條帶。

3.KTDA濃度為100、10、1 ug.mL-1,作用72 h時(shí),能抑制人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、人肝癌細(xì)胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系、人宮頸癌細(xì)胞系Hela、人舌癌細(xì)胞系Tca 8113的生長(zhǎng),并呈濃度依賴(lài)性。當(dāng)KTDA濃度為10 ug.mL-1時(shí),處理72 h后,于熒光顯微鏡下觀察到凋亡小體,電泳結(jié)果顯示典型的DNA梯狀條帶。

結(jié)論:1.乳香揮發(fā)油及其脂質(zhì)體和KTDA對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、人肝癌細(xì)胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病細(xì)胞系、人宮頸癌細(xì)胞系Hela、人舌癌細(xì)胞系Tca 8113有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,其抑制效果隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)(乳香揮發(fā)油)、濃度的加大而逐漸增強(qiáng)。

2.乳香揮發(fā)油能抑制肝癌細(xì)胞株SMMC—7721的增殖,且細(xì)胞阻滯于G1期,并可能通過(guò)上調(diào)Bax/Bcl-2的比例誘導(dǎo)SMMC—7721細(xì)胞的凋亡。

3.由半數(shù)抑制濃度(IC50)的數(shù)值表明,乳香揮發(fā)油及其脂質(zhì)體和KTDA對(duì)MCF-7、SMMC—7721、K562、Hela比較敏感,Tca 8113次之,并可能通過(guò)誘導(dǎo)5種腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤的作用。

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