背景[1-3]
MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系是一種弱免疫原性的細胞系，由纖維肉瘤在C57BL/6小鼠中誘導(dǎo)產(chǎn)生。這種細胞系已被廣泛用于誘導(dǎo)腫瘤反應(yīng)性T淋巴細胞的過繼免疫療法研究中。同時，MCA-205細胞也被用作刺激劑，以研究細胞因子的表達。此外，該細胞系還是研究腫瘤細胞免疫反應(yīng)和支持靶向癌癥免疫療法開發(fā)的絕佳模型。
MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系
MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系細胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應(yīng)用[4-5]
MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系可以用于KIF20A通過PI3K-AKT信號通路促進纖維肉瘤發(fā)生發(fā)展的研究
Kif20a在小鼠纖維肉瘤中的作用研究為明確Kif20a在小鼠纖維肉瘤中的作用,我們首先檢測了其在小鼠纖維肉瘤細胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系中的表達情況,發(fā)現(xiàn)Kif20a高表達。通過轉(zhuǎn)染成功構(gòu)建出Kif20a敲低的小鼠纖維肉瘤細胞系,并以此為研究對象,檢測其細胞增殖、凋亡、侵襲、遷移的變化,并用Kif20a敲低的小鼠纖維肉瘤細胞系構(gòu)建荷瘤鼠,觀察其腫瘤大小及腫瘤轉(zhuǎn)移情況,結(jié)果顯示,Kif20a下調(diào)后,小鼠纖維肉瘤細胞的活力降低,細胞周期阻滯在G2/M期,克隆形成能力明顯降低,凋亡增加,侵襲、遷移能力降低,腫瘤減小,腫瘤組織Ki67的表達降低,提示在小鼠纖維肉瘤中,Kif20a下調(diào)仍能抑制細胞增殖、遷移和侵襲,促進細胞凋亡,抑制腫瘤生長。
綜上所述,本研究顯示KIF20A是軟組織肉瘤生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的核心基因,KIF20A在軟組織肉瘤中高表達與軟組織肉瘤的預(yù)后密切相關(guān)。在纖維肉瘤細胞系中,轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn)下調(diào)KIF20A,多種與生物學(xué)進程及信號通路相關(guān)的基因發(fā)生變化。進一步研究發(fā)現(xiàn),下調(diào)KIF20A后,PI3K-AKT活性受到抑制,其下游NF-κB、細胞周期、凋亡等信號通路也發(fā)生改變,從而抑制了腫瘤的增殖、遷移、侵襲及轉(zhuǎn)移,促進了腫瘤的凋亡。本研究明確了KIF20A在小鼠纖維肉瘤細胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纖維肉瘤細胞系中的表達情況,探討了其在纖維肉瘤中的作用及相關(guān)機制,提示KIF20A是治療纖維肉瘤潛在的分子標志物和治療靶點,為纖維肉瘤的治療提供新的思路。
參考文獻
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