背景[1-3]
CAL 27人舌鱗癌細胞是一種人舌鱗癌細胞系，被廣泛用于口腔癌和舌癌的研究。這種細胞系可以用于體外實驗，以更好地理解舌鱗癌的發(fā)生和發(fā)展機制，探索新的治療策略，以及評估藥物的療效和毒性。
與其他細胞系相比，CAL 27人舌鱗癌細胞具有一些獨特的生物學特性，例如高侵襲性和轉移能力，以及對某些藥物的敏感性和耐藥性。這些特性使得CAL 27成為研究口腔癌和舌癌的理想細胞系。
CAL 27人舌鱗癌細胞的建系時間較早，建立于20世紀80年代初。該細胞系來源于一位56歲白人男性的病變舌中間部分，具有高密度顆粒狀胞漿和上皮細胞樣的形態(tài)，貼壁生長。
使用CAL 27人舌鱗癌細胞進行體外實驗時，需要使用適當的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)，例如DMEM加10%FBS。同時，為了保持細胞的穩(wěn)定性和生物學特性，需要注意避免污染和交叉污染，并及時進行傳代和凍存。
CAL 27人舌鱗癌細胞系是一種重要的細胞系，在口腔癌和舌癌的研究中發(fā)揮著重要作用。通過使用這種細胞系，可以更好地了解疾病的發(fā)病機制和發(fā)展過程，探索新的治療策略，以及評估藥物的療效和毒性。
CAL 27人舌鱗癌細胞
CAL 27人舌鱗癌細胞培養(yǎng)操作
1)復蘇CAL 27人舌鱗癌細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)CAL 27人舌鱗癌細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)CAL 27人舌鱗癌細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應用[4][5]
CAL 27人舌鱗癌細胞可以用于PDGF-BB和乳酸介導舌鱗癌細胞與癌相關成纖維細胞糖代謝共生及機制研究
研究以PDGF-BB和乳酸為切入點,探索PDGF-BB和乳酸介導舌鱗癌細胞與癌相關成纖維細胞糖代謝偶聯共生作用及分子機制,為探索通過干預PDGF-BB和/或乳酸作用逆轉腫瘤發(fā)生發(fā)展奠定基礎。
[方法]1.常規(guī)培養(yǎng)CAL 27人舌鱗癌細胞、口腔黏膜正常成纖維細胞hOMF;酶消化組織塊法和差速貼壁分離純化舌鱗癌成纖維細胞和癌旁成纖維細胞。
2.miRNA-26a-5p靶基因預測,雙熒光素酶基因報告驗證。構建過表達miRNA-26a-5p慢病毒載體轉染成纖維細胞,以空載質粒為對照。q-PCR檢測miRNA-26a-5p與靶基因表達情況。
3.采用含20ng/ml PDGF-BB無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)正常成纖維細胞3天,應用q-PCR、蛋白免疫印記、免疫熒光檢測成纖維細胞活化、糖代謝和線粒體自噬相關指標。葡萄糖攝取實驗和乳酸分析試劑盒分別檢測葡萄糖攝取和乳酸分泌能力。JC-1和MDC分析線粒體膜電位和自噬情況;免疫熒光和透射電鏡觀察細胞內自噬體,Mitophagy試劑盒檢測線粒體自噬。應用原代培養(yǎng)成纖維細胞和過表達miRNA-26a-5p成纖維細胞行進一步驗證。
4.建立PDGF-BB活化成纖維細胞與舌鱗癌CAL 27人舌鱗癌細胞間接共培養(yǎng)模型,CCK8檢測CAL 27人舌鱗癌細胞增殖情況;q-PCR和ELSIA檢測PDGF-BB表達和分泌情況;蛋白免疫印記檢測bax、bcl-2、MCT-1、LDH-B和NF-κB/p-NF-κB,以及免疫熒光染色進一步分析MCT-1、LDH-B和NF-κB表達情況。
5.PDGF-BB活化成纖維細胞上清可促進CAL 27人舌鱗癌細胞增殖,加入單羧酸轉運蛋白(轉運乳酸)抑制劑CHC后,降低了其促增殖作用。乳酸也可促進CAL 27人舌鱗癌細胞的增殖,并下調bax表達,上調bcl-2、NF-κB、p-NF-κB、MCT-1和LDH-B蛋白表達;上調CAL 27人舌鱗癌細胞對PDGF-BB的表達和分泌,加入CHC和NF-κB通路抑制劑SC75741后,上述作用被明顯下調,差異具有統計學意義(p<0.05)。
6.PDGF-BB活化成纖維細胞與CAL 27人舌鱗癌細胞共移植裸鼠皮下,與CAL 27人舌鱗癌細胞組相比,Cal-27+hOMF和Cal-27+CAFs組形成的混合移植瘤體積和重量明顯增加,并且Cal-27+CAFs組更加顯著,各組之間差異具有統計學意義(p<0.05)。瘤體免疫組化染色顯示α-SMA、MCT-4、LDH-A主要表達于腫瘤間質,p-NF-KB則主要表達于腫瘤細胞,MCT-1則在間質細胞和腫瘤細胞均表達明顯。多重免疫熒光染色顯示腫瘤間質中α-SMA與MCT-4和LDH-A以及與LC3A/B均存在明顯共定位,并且LC3A/B熒光強度在Cal-27+hOMF和Cal-27+CAFs組明顯增強,具有統計學意義(p<0.05)。
參考文獻
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[3]Energy metabolism disorder mediated ammonia gas-induced autophagy via AMPK/mTOR/ULK1-Beclin1 pathway in chicken livers[J].Li Zhuo;Miao Zhiying;Ding Linlin;Teng Xiaohua;Bao Jun.Ecotoxicology and Environmental Safety,2021
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[5]任曉斌.PDGF-BB和乳酸介導舌鱗癌細胞與癌相關成纖維細胞糖代謝共生及機制研究[D].昆明醫(yī)科大學,2023.