背景[1-3]
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒通常用于體外細(xì)胞培養(yǎng)中，檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性。它基于MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑)的代謝產(chǎn)物，可用于評估細(xì)胞的增殖和存活情況。
其原理基于MTT（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan。在特定溶劑存在的情況下，這個深紫色的產(chǎn)物可以被完全溶解，然后通過酶標(biāo)儀測定570nm波長附近的吸光度。
細(xì)胞增殖越多越快，吸光度就會越高；而細(xì)胞毒性越大，吸光度則會越低。因此，通過測定吸光度，就可以間接地反映出細(xì)胞的增殖和毒性情況。
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中，特別是藥物篩選、細(xì)胞毒性測試以及細(xì)胞生長和增殖的研究等領(lǐng)域。不同品牌和規(guī)格的試劑盒可能會有不同的價格，但一般來說，其價格會根據(jù)包裝數(shù)量、純度、品牌等因素而有所差異。
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒通常包含以下成分：
MTT溶液：含有MTT的溶液，用于檢測細(xì)胞增殖。
DMSO:二甲基亞砜，作為溶劑用于溶解MTT。
培養(yǎng)基：用于細(xì)胞培養(yǎng)的液體，通常包含營養(yǎng)物質(zhì)和添加劑。
標(biāo)準(zhǔn)品：用于校準(zhǔn)和定量MTT的代謝產(chǎn)物。
使用該試劑盒時，通常需要將細(xì)胞培養(yǎng)在含有特定濃度的MTT的培養(yǎng)基中。MTT會被活細(xì)胞還原為紫色的甲基藍(lán)，其顏色的深淺與細(xì)胞數(shù)量成正比。然后，通過測量紫色甲基藍(lán)的吸光度來評估細(xì)胞增殖和存活情況。
應(yīng)用[4-5]
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒可以用于利用MTT/MTS法和細(xì)胞成像技術(shù)評價fHMSN的載藥性及AC對細(xì)胞增殖的影響
在細(xì)胞生物學(xué)中,用于檢測細(xì)胞活力及細(xì)胞增殖的方法主要有3 H-TdR摻入法和MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒MTT比色法:3 H-TdR摻入法是一種直接通過測定分裂的細(xì)胞數(shù)來評價細(xì)胞增殖能力的方法;MTT法是一種間接的方法,即通過檢測細(xì)胞活力(cell viability)來檢測樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目,進(jìn)而評價細(xì)胞的增殖能力。
目前比較常用的是MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒MTT比色法。MTT法(MTT中文名稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽),其檢測原理是活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將培養(yǎng)基中的MTT還原,產(chǎn)生不溶于水的紫色結(jié)晶——甲瓚顆粒,而死細(xì)胞不能產(chǎn)生琥珀酸脫氫酶,通過用酶聯(lián)免疫檢測儀在492nm波長處測定其光吸收值,建立甲瓚生成量與活細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系,從而獲得細(xì)胞存活率的一種測量方法。
研究表明,在一定細(xì)胞濃度范圍內(nèi),光吸收值與活細(xì)胞數(shù)成正比。
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒已廣泛用于細(xì)胞毒性實驗、生物相容性評價、生物活性因子的檢測以及抗腫瘤藥物的篩選等等。MTS是一種新型的四唑類化合物,原理與MTT相同,但其產(chǎn)生的甲瓚是水溶性的,因而實驗操作中減少了MTT中用DMSO溶解甲瓚的步驟,比MTT法高效。另外,MTS還原產(chǎn)物顏色較深,吸光度值變異范圍大,靈敏度更高,結(jié)果更準(zhǔn)確。MTS法能更快捷準(zhǔn)確地測定細(xì)胞的增殖反應(yīng),而且能夠避免由于人為操作、實驗環(huán)境等因素造成的實驗誤差,大大地提高了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。
本文的研究分為兩部分,首先利用MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒MTT法和細(xì)胞成像技術(shù)研究了無機(jī)納米材料——中空介孔納米硅球(fHMSN)的生物相容性,并以抗腫瘤藥物阿霉素(DOX)作為藥物模型,研究了fHMSN擔(dān)載藥物DOX進(jìn)入癌細(xì)胞后的藥物釋放作用。此外,還應(yīng)用MTS方法和細(xì)胞成像技術(shù)研究了可溶性小分子有效碳(AC)溶液對體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞及人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(PMSC細(xì)胞)增殖的影響。
參考文獻(xiàn)
[1]Organization of Organic Molecules with Inorganic Nanoparticles:Hybrid Nanodiodes[J].Kallol Mohanta;;Sudip K.Batabyal;;Amlan J.Pal.Advanced Functional Materials,2008
[2]Stimuli‐Responsive Controlled Drug Release from a Hollow Mesoporous Silica Sphere/Polyelectrolyte Multilayer Core–Shell Structure[J].Yufang Zhu;;Jianlin Shi Prof.;;Weihua Shen;;Xiaoping Dong;;Jingwei Feng;;Meilin Ruan;;Yongsheng Li.Angewandte Chemie,2005
[3]Structural characterization of aquatic humic substances–The need for a multiple method approach[J].Gudrun Abbt-Braun;;Ulrich Lankes;;Fritz H.Frimmel.Aquatic Sciences,2004
[4]In vitro anti-influenza virus activity of synthetic humate analogues derived from protocatechuic acid[J].F.-J.Lu;;S.-N.Tseng;;M.-L.Li;;S.-R.Shih.Archives of Virology,2002(2)
[5]于雪.利用MTT/MTS法和細(xì)胞成像技術(shù)評價fHMSN的載藥性及AC對細(xì)胞增殖的影響[D].吉林大學(xué),2017.