背景及概述^[1]

人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞分離自腦組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。小膠質(zhì)細胞是神經(jīng)膠質(zhì)細胞的一種，相當于腦和脊髓中的巨噬細胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的道也是最主要的一道免疫防線。小膠質(zhì)細胞(microglia)廣泛分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem，CNS)，從數(shù)量上小膠質(zhì)細胞占中樞神經(jīng)系統(tǒng)中整個膠質(zhì)細胞數(shù)目的5%～20%。關(guān)于小膠質(zhì)細胞的起源，目前仍有爭議。少數(shù)人認為，小膠質(zhì)細胞起源于外胚層。也有人認為，小膠質(zhì)細胞來源于骨髓造血干細胞。Hortega的經(jīng)典見解認為，此種細胞來源于中胚層，是胚胎發(fā)育后期開始形成血管時侵入腦內(nèi)的。小膠質(zhì)細胞是CNS固有的免疫成分細胞，正常情況下處于靜止狀態(tài)，缺乏吞噬功能，但具有吞飲功能和一定的遷移能力。小膠質(zhì)細胞活化是CNS在許多病理條件下，有時甚至是非常微弱刺激作用下的常見反應(yīng)，表現(xiàn)為小膠質(zhì)細胞在局部不同程度的增生與聚集，同時常伴有細胞形態(tài)、免疫表型與功能等一系列的變化。

功能^[1]

人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞的主要功能：①神經(jīng)膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過程中；②當程序性細胞死亡時，或在大腦發(fā)育的過程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或受到病理損壞時，神經(jīng)膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細胞；③膠質(zhì)細胞能在Ⅱ類組織相容性復(fù)合體表達CD-4陽性T細胞時表達抗原，能進行Fc介導(dǎo)的巨噬作用，并且與造血細胞和巨噬細胞組織共享抗原。

分離純化^[2]

取5個月人工藥物引產(chǎn)的胎兒腦組織，將腦組織剪碎、研磨、過濾、離心獲取混合膠質(zhì)細胞懸液，用DMEM/F12完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度為2×1010cells/L，接種于75cm2培養(yǎng)瓶中(記作first0d)；7-10d后，進行第1次純化。此次純化采用輕柔搖動法將貼壁不牢的小膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞與底層的星形膠質(zhì)細胞分離并轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)擴增(記作second0d)；4-5d后，混合的小膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞匯合成片，采用胰酶-EDTA消化法結(jié)合差速貼壁法進行第2次純化。此次純化將消化得到的細胞懸液離心和重懸，接種于培養(yǎng)瓶(記作0h)；2h后，小膠質(zhì)細胞貼壁生長，少突膠質(zhì)細胞依然漂浮在培養(yǎng)上清中，此時通過移走上清以去除少突膠質(zhì)細胞，即得到高純度的小膠質(zhì)細胞；運用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)、流式細胞術(shù)結(jié)合細胞表面或胞內(nèi)免疫熒光抗體染色技術(shù)檢測所分離的小膠質(zhì)細胞CD45，CD11b和CD68的陽性率，以計算其純度；通過吞噬熒光微球評價其吞噬功能；利用胞膜邊緣波動(membraneruffling)現(xiàn)象結(jié)合熒光標記的鬼筆環(huán)肽染色技術(shù)鑒定其活化水平。結(jié)果所分離的小膠質(zhì)細胞中，98%的細胞表達CD45，CD11b和CD68，并且能夠吞噬熒光微球。

培養(yǎng)^[1]

人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法，在培養(yǎng)基營養(yǎng)缺失數(shù)天后經(jīng)搖床震蕩收集脫落細胞制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)CD11b/c[OX42]免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

主要參考資料

[1]小膠質(zhì)細胞的發(fā)育和功能

[2]人小膠質(zhì)細胞的分離、純化、特異分子表達與吞噬功能研究