概述[1]
組織來(lái)源：結(jié)腸；回盲腸結(jié)直腸腺癌；培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS；形態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣。
相關(guān)研究[2-4]
將HCT-8人類結(jié)腸癌細(xì)胞分成二甲雙胍組(MET)、順鉑組(DDP)、二甲雙胍聯(lián)合順鉑組(MET+DDP)、空白對(duì)照組(CK) 4組，MTT實(shí)驗(yàn)觀察4組細(xì)胞于24 h、48 h、72 h時(shí)的增殖能力；流式細(xì)胞術(shù)觀察各組細(xì)胞48 h的凋亡比例；Western blotting觀察各組細(xì)胞48 h時(shí)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3(激活型)以及AKT/GSK-3通路蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果該實(shí)驗(yàn)中MET+DDP組的細(xì)胞增殖能力弱于其它三組(P<0. 05)；細(xì)胞凋亡比例高于其它三組(P<0. 05)；Bax、caspase-3(激活型)表達(dá)量高于其它組群，Bcl-2、P-AKT、P-GSK-3表達(dá)量低于其它組群，AKT、GSK-3在4組中表達(dá)量相對(duì)恒定(P>0. 05)。結(jié)論二甲雙胍、順鉑可能通過(guò)下調(diào)AKT/GSK-3信號(hào)通路，改變Bcl-2家族蛋白的表達(dá)活性從而促進(jìn)HCT-8人類結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡，并促進(jìn)p-caspase-3剪切轉(zhuǎn)化為caspase-3(激活型)；二甲雙胍與順鉑可協(xié)同發(fā)揮促HCT-8人類結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用。
體外常規(guī)培養(yǎng)HCT-8；設(shè)立低劑量組、中劑量組、高劑量組及空白對(duì)照組；各實(shí)驗(yàn)組均根據(jù)不同劑量加入腫節(jié)風(fēng)注射液。應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)加入不同劑量腫節(jié)風(fēng)注射液后24、48 h和72 h后各組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況；用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞加入不同濃度的腫節(jié)風(fēng)后再連續(xù)培養(yǎng)12 d后進(jìn)行上級(jí)檢測(cè)，計(jì)算細(xì)胞的克隆形成率。
Annexin V/PI檢測(cè)腫瘤細(xì)胞與腫節(jié)風(fēng)注射液反應(yīng)24 h后的凋亡情況。結(jié)果低劑量組對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞沒(méi)有明顯的生長(zhǎng)抑制作用。MTT顯示同樣的作用時(shí)間下，中劑量組及高劑量組腫瘤細(xì)胞抑制率比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 01)，治療48、72h后高劑量組與低劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05)；細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示高劑量組對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用較為明顯，各加藥組與空白對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05)。Annexin V/PI顯示，隨著腫節(jié)風(fēng)濃度的增加，HCT-8細(xì)胞的凋亡率也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，空白對(duì)照組與加藥組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0. 05)。結(jié)論腫節(jié)風(fēng)對(duì)結(jié)腸癌HCT-8腫瘤細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡的作用。
采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度迷迭香酸作用不同時(shí)間后HCT-8細(xì)胞的增殖情況；根據(jù)CCK-8法結(jié)果確定迷迭香酸15、45、75μmol/L作用72 h，考察HCT-8細(xì)胞的凋亡和相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)；通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HCT-8細(xì)胞的凋亡率；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)法檢測(cè)p53、Bax和Puma基因的m RNA表達(dá)；通過(guò)Western blotting法檢測(cè)p53、Bax、Puma和active Caspase-9的蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果迷迭香酸能夠抑制HCT-8細(xì)胞的增殖，并呈時(shí)間和濃度依賴性。15、45μmol/L的迷迭香酸主要誘導(dǎo)HCT-8細(xì)胞早期凋亡(P<0.01)，75μmol/L的迷迭香酸主要誘導(dǎo)HCT-8細(xì)胞晚期凋亡(P<0.01)。迷迭香酸可以使Puma的m RNA表達(dá)上調(diào)，并呈濃度依賴性；45、75μmol/L的迷迭香酸可以使p53和Bax的m RNA表達(dá)升高(P<0.05)。迷迭香酸可以上調(diào)Puma、Bax和active Caspase-9的蛋白表達(dá)水平，并呈濃度依賴性；75μmol/L的迷迭香酸可以使p53的蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.05)。結(jié)論迷迭香酸對(duì)HCT-8細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，并且是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡實(shí)現(xiàn)的，促凋亡蛋白p53、Puma、Bax和active Caspase-9誘導(dǎo)了凋亡的發(fā)生。
主要參考資料
[1] HCT-8/人盲腸腺癌細(xì)胞說(shuō)明書
[2] 于敬坤，李明志，隨振陽(yáng)，張琪，田煒，胡琨，楊光華，張國(guó)志，王長(zhǎng)友.二甲雙胍與順鉑聯(lián)合誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞凋亡的研究[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2019，29(02):43-50.
[3] 謝雅，楊關(guān)根，裘建明，閆文峰.腫節(jié)風(fēng)誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞凋亡的體外實(shí)驗(yàn)研究[J].醫(yī)藥論壇雜志，2018，39(10):10-13+16.
[4] 婁諍，陸仲夏，俞雅蓉，王大維.迷迭香酸對(duì)人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞增殖和凋亡的影響及分子機(jī)制研究[J].中草藥，2018，49(13):3051-3055.