背景及概述^[1-2]

造血基質細胞主要存在于骨髓，臍血中是否存在造血基質細胞，能否在體外擴增，有關這些問題目前相關研究報道少。有研究成功分離培養(yǎng)了人臍血源黏附細胞，發(fā)現(xiàn)分離培養(yǎng)困難。采用3%明膠聯(lián)合Ficoll分離MNC，結果細胞的貼壁率及原代培養(yǎng)的成功率都非常低。為此，在前期研究的基礎上，需要探索不同明膠濃度及淋巴細胞分離液對人臍血源黏附細胞原代培養(yǎng)的影響，希望能探尋一種合適的分離培養(yǎng)條件，為人臍血源黏附細胞在臨床早日應用奠定基礎。

分類^[1]

Percoll和Ficol1是目前常用的細胞分離液，其分離血細胞的原理是利用各種細胞密度的差異，將其分離于自上而下的不同液體層次中。Percoll由表面黏附有聚乙烯吡咯酮的膠體硅組成，而Ficol1主要由葡聚糖和泛影酸鈉組成。如果需分離的標本量較少，使用細胞分離液能形成較好的MNC層，也方便收集；但如果需要分離的標本量較多，不但分離液使用量大，且離心后部分紅細胞仍然可能懸浮在分離液中，致使收集的MNC可能混雜紅細胞。此外，界面過大也不利于MNC的收集。明膠溶液可以破壞紅細胞表面電荷，加速紅細胞沉降，使之與其它細胞分離。3%明膠沉降紅細胞的效果雖然，但分離后除MNC外，還含有其它有核細胞，對于僅需要MNC為對象的研究，用該液分離并不能達到預期效果。另外，明膠溶液能否去除臍血中的幼稚紅細胞，尚待實驗研究證實。因此，目前大多實驗和臨床應用中采用明膠聯(lián)合分離液進行血細胞MNC的分離。

應用^[2-3]

應用淋巴細胞分離液純化大鼠胰島。有研究建立一種簡便、易行和高效的胰島分離純化方法，以減少對胰島細胞的損傷，獲得高質量的胰島組織。選用SD大鼠經膽總管原位灌注膠原酶液，分離消化胰腺組織，用淋巴細胞分離液純化胰島細胞。結果：可收獲大量的高純度胰島，純度達95%以上，體外葡萄糖刺激實驗表明胰島對刺激反應良好，將胰島移植于糖尿病小鼠體內可短期糾正其高血糖狀態(tài)。結論：應用單一密度淋巴細胞分離液純化大鼠胰島的方法是一種操作簡單、價格低廉、重復性好的大鼠胰島純化方法。

淋巴細胞分離液對T細胞陽性花環(huán)和非T細胞陽性花環(huán)計數(shù)結果影響的研究。有研究探討單克隆抗體SPA紅細胞花環(huán)法(McAb-A-E法)檢驗T淋巴細胞亞群時，淋巴細胞分離液對陽性花環(huán)細胞計數(shù)結果以及非T淋巴細胞陽性花環(huán)計數(shù)結果的影響。方法選擇淋巴細胞分離液法分離的單個核細胞(PBMC)和不加任何物質的抗凝血用自然沉降法分離的混合細胞，用10倍量稀釋液洗滌1次。兩種細胞用McAb-A-E直接法進行樣本對照，并作統(tǒng)計學處理。

結果對20例臨床標本用兩種不同方法制取單個核細胞懸液的實驗對照研究，2組CD3+(t=-4.197，P=0.000)、CD4+(t=-5.177，P=0.000)、CD8+(t=-4.240，P=0.000)、CD4+/CD8+(t=-1.958，P=0.095)進行比較，CD3+、CD4+、CD8+3組結果差異有統(tǒng)計學意義，均為P<0.001。CD4+/CD8+結果比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；2組非T淋巴細胞陽性花環(huán)比較(t=-5.638，P=0.000)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。結論淋巴細胞分離液分離的PBMC細胞，用10倍量的稀釋液洗滌1次，細胞表面黏附的黏稠淋巴細胞分離液是無法全部除去的，其對實用McAb-A-E直接法實驗的影響是使陽性花環(huán)淋巴細胞計數(shù)結果偏高，相對的陰性淋巴細胞計數(shù)結果偏低。

主要參考資料

[1] 不同明膠濃度及淋巴細胞分離液對人臍血源黏附細胞原代培養(yǎng)的影響

[2] 應用淋巴細胞分離液純化大鼠胰島的實驗研究

[2] 淋巴細胞分離液對T細胞陽性花環(huán)和非T細胞陽性花環(huán)計數(shù)結果影響的研究