淋巴細胞的主要來源是外周血，分離的原則是回收率較高，純度較好，失活較低。分離方法根據(jù)不同的實驗目的可采用梯度密度離心法，吸附分離法和黏附貼壁法等。其中利用淋巴細胞分離液進行梯度密度離心是最常用的方法。

關于淋巴細胞分離液

淋巴細胞分離液是一種根據(jù)細胞密度差異，借助離心產生的重力加速度，進行細胞分離純化的常用試劑。可用于體外分離外周血淋巴細胞，也可用于從其他來源中分離單核細胞，包括臍帶血細胞和骨髓細胞，適用于從血液和其它組織勻漿中分離所需細胞，在醫(yī)學和醫(yī)療中有廣泛的應用。

淋巴細胞分離液的原理

外周血中各種細胞的密度不同，例如人紅細胞密度為1.093g/ml，粒細胞為1.092g/ml，淋巴細胞為1.074±0.001g/ml。淋巴細胞分離液的密度介于1.075-1.070g/ml之間，因此在離心力的作用下，不同的細胞按相應密度梯度分布，從而將不同的細胞加以分離。

淋巴細胞分離液使用注意事項

1. 分離液在低溫時呈較高密度，高溫時呈較低密度。因此分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前應將樣本和淋巴細胞分離液均恢復到室溫。

2. 實驗過程如果需要稀釋樣本，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液以及培養(yǎng)基，鈣鎂離子會導致血細胞凝集，降低細胞的得率以及純度。

3. 抗凝劑選擇：肝素、EDTA、枸櫞酸。

4. 盡量避免使用高聚合材料的離心管，其帶有的靜電作用會導致細胞貼壁影響分離效果，推薦使用未經堿處理的玻璃離心管。

5. 吸取過多的淋巴細胞層以及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。