背景及概述^[1]

連接酶是一種能催化兩個不同或相同分子的兩端相連接的酶，此反應(yīng)與ATP分解反應(yīng)相偶聯(lián)。T4RNALigase（T4RNA連接酶）是以不依賴于模板的形式催化供體核酸的5'-磷?；┒撕褪荏w核酸的3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶活性依賴ATP，可作用于廣泛的底物，包括RNA，DNA，寡核糖核酸、寡脫氧核糖核酸和很多其它核酸衍生物。T4RNALigase主要用于RNA5´末端加寡聚核酸用于映射和測序5´端，或用于cDNA合成(RACE)；用于3'-末端RNA標記；用于連接RNA和DNA；用于修飾突變RNA。

制備方法^[1]

T4RNALigase1可用于制備腺苷?；宇^，腺苷?；宇^能夠被截短型的T4RNA連接酶2特異性識別，在沒有ATP存在的條件下將腺苷酰化接頭5’端有腺苷?；揎椀牧姿崤cRNA的3’端的羥基連接，形成3,5-磷酸二酯鍵。

其制備方法包括：

(1)先合成一段寡核苷酸，寡核苷酸5’端磷酸化修飾，3’端進行氨基修飾、雙脫氧胞嘧啶、磷酸修飾、熒光標記修飾、倒轉(zhuǎn)堿基修飾或生物素標記修飾中的一種；

(2)將步驟(1)的寡核苷酸在非截短型的T4RNALigase1催化下與ATP反應(yīng)，獲得腺苷?；宇^。

本申請的制備方法，打破傳統(tǒng)化學合成腺苷?；宇^的思維限制，先合成寡核苷酸，T4RNALigase1將ATP分解成AMP，AMP轉(zhuǎn)移到磷酸上，形成腺苷酰化，由于3’端修飾，寡核苷酸保持在腺苷酰化中間態(tài)，從而制備出腺苷酰化接頭。本申請的制備方法成本低、效率高，能滿足使用需求，有效的降低了RNA高通量測序的成本。

參考資料

[1] CN201410391721.X一種制備腺苷?；宇^的方法及腺苷?；宇^