簡(jiǎn)介
(+)-生物素-PEG2-NHS酯是一種白色或類白色固體，可溶于有機(jī)溶劑。它是一種生物素衍生物，具有較強(qiáng)的生物素親和力。(+)-生物素-PEG2-NHS是一種常用的生物偶聯(lián)試劑，具有廣泛的應(yīng)用。它可以與生物素靶向分子結(jié)合，從而用于檢測(cè)、定量和純化目標(biāo)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)和核酸。
背景技術(shù)
生物素與鏈親和素之間的緊密相互作用在生物化學(xué)和化學(xué)生物學(xué)中得到了廣泛的應(yīng)用，許多生物素偶聯(lián)物已被開發(fā)出來用于目標(biāo)蛋白的鑒定、標(biāo)記或功能化生物素偶聯(lián)物也被應(yīng)用于全基因組分析技術(shù)的開發(fā)。例如，ChIP測(cè)序（ChIP-seq）將染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）與大規(guī)模平行測(cè)序相結(jié)合，以全基因組的方式鑒定DNA結(jié)合蛋白的結(jié)合位點(diǎn)3,4，但化學(xué)親和力捕獲，如生物素-親和素相互作用，也可以用作抗原-抗體相互作用的替代方法。常常引入生物素化的片段可能會(huì)導(dǎo)致配體活性的喪失。因此，本文將介紹開發(fā)保留生物活性的新型生物素偶聯(lián)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)化合物是一項(xiàng)非常重要的工作。在此，本文將介紹一種人工合成的類維甲酸Am580與(+)-生物素-PEG2-NHS酯偶聯(lián)物合成，便于進(jìn)一步的生物學(xué)評(píng)價(jià)。
偶聯(lián)反應(yīng)[1]
1、向化合物9（36 mg，0.065 mmol）和三乙胺（5滴）的乙腈（3 mL）溶液中，于0℃加入化合物(+)-生物素-PEG2-NHS酯(14，25 mg，0.05 mmol）。溶液在室溫下攪拌5小時(shí)后，蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用氯仿從飽和氯化銨水溶液中萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。溶劑蒸發(fā)后，粗產(chǎn)物通過硅膠柱層析純化（洗脫劑：氯仿/甲醇=5/1），得到淡橙色固體10（36mg，產(chǎn)率67%）。
2、向化合物11（43毫克，0.067毫摩爾）的二氯甲烷（4毫升）溶液中加入10滴三氟甲基乙酸，反應(yīng)液在室溫下攪拌40分鐘。真空除去溶劑后，殘余物溶于乙腈（5毫升），并加入5滴三乙胺，于0℃向該溶液中加入化合物(+)-生物素-PEG2-NHS酯(14，34毫克，0.067毫摩爾），反應(yīng)混合物在室溫下攪拌70小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，殘余物用氯仿和水萃取，有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥。溶劑蒸發(fā)后，粗產(chǎn)物通過硅膠柱層析純化（洗脫劑：氯仿/甲醇=4/1），得到白色固體13（51毫克，兩步產(chǎn)率82%）。
參考文獻(xiàn)
[1]SHINYA FUJII, SHUICHI MORI, HIROYUKI KAGECHIKA, et al. Development of biotin-retinoid conjugates as chemical probes for analysis of retinoid function[J]. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2018,28(14):2442-2445. DOI:10.1016/j.bmcl.2018.06.011.