背景技術(shù)
杜鵑醇的化學(xué)名稱為4-(4-羥苯基)-2-丁醇,純品為白色粉末,易溶于水,溶于甲醇、乙醇和乙腈等有機溶劑。杜鵑醇主要存在于樺木、槭樹科、杉木和郁金等藥用植物中,主要作為生物催化法合成香料(如覆盆子酮和白樺苷)的原料;因結(jié)構(gòu)與絡(luò)氨酸酶活性抑制物質(zhì)類似,大多具有酚式結(jié)構(gòu),杜鵑醇具有抑制黑色素合成的作用,因此還被用作化妝品美白成分。然而，正是由于具有抑制黑色素合成的作用,從而干擾了皮膚中絡(luò)氨酸向黑色素的正常酶轉(zhuǎn)化過程,添加了杜鵑醇美白成分的化妝品會造成皮膚美白過度而出現(xiàn)白斑等過敏癥狀,目前已有數(shù)千起“白斑”癥狀投訴。
由于杜鵑醇的副作用,2013年9月份,臺灣地區(qū)發(fā)布公告,禁止在化妝品中使用杜鵑醇成分。雖然有廠商將杜鵑醇作為化妝品新原料向國家食藥局提出過行政許可申請,但因未通過安全性審批,含有杜鵑醇的化妝品均未獲批在我國上市銷售。2013年11月份,國家食藥總局在《關(guān)于調(diào)整化妝品許可備案管理有關(guān)事宜的通知》中著重加強了對美白類產(chǎn)品管理措施,將宣稱有助于皮膚美白或能減輕皮膚表面色素沉著的化妝品，一并納入祛斑類化妝品管理,自2015年1月1日起,上述產(chǎn)品必須取得特殊用化妝品批準(zhǔn)證書后方可組織生產(chǎn)。
為了有效的監(jiān)控含有杜鵑醇的美白類化妝品,采用有效手段檢測化妝品中杜鵑醇的成分是關(guān)鍵。目前國內(nèi)外文獻(xiàn)中對杜鵑醇的報道主要集中于其在生物體內(nèi)賦存狀況和其生物合成方法等方面,未見有涉及到其檢測技術(shù)研究方面的報道,化妝品中杜鵑醇檢測還處于空白狀態(tài)。
檢測方法[1]
一、建立杜鵑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線
將50mg杜鵑醇(純度≥85%)溶于乙腈配制成濃度為1000ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用含有體積百分比0.1%的甲酸-乙腈配制成濃度分別為15,50,100,250,500,1000mg/L共6個濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,取各濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液,經(jīng)0.22um濾膜過濾，取10L進(jìn)樣按液相色譜條件進(jìn)行測定,每個系列進(jìn)樣3次,取平均峰面積值。
液相色譜條件：高效液相色譜儀,配有熒光檢測器(安捷倫1260,美國安捷倫公司);色譜柱:Phenomenex Kinetex C18,100×4.6mm(內(nèi)徑),2.6um(粒徑);流動相:A:體積濃度為0.1%的甲酸水溶液;B:乙腈;洗脫方式:梯度洗脫:0~6 min,25%B,6~7min,90%B,7~9min,25%B;流速:1.0mL/min;熒光檢測條件:激發(fā)波長:280nm,發(fā)射波長:315nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10uL。
以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，與其對應(yīng)的杜鵑醇濃度為橫坐標(biāo)作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,求得回歸方程為y=0.2342x+1.1720。如附圖所示,為熒光檢測器所檢測到的峰面積與杜鵑醇濃度的關(guān)系曲線,可見,在0.05~1000mg/L濃度范圍內(nèi),杜鵑醇的濃度值與響應(yīng)峰面積值之間的相關(guān)系數(shù)為0.9998，呈良好的線性關(guān)系。杜鵑醇的檢出限為0.5mg/kg,能夠滿足化妝品成分測試的要求。
二、化妝品中杜鵑醇的檢測
1、試樣處理
稱取待測樣本0.20g(精確至0.001g),置于10mL塑料離心管中,加0.15mL 0.02mol/L的醋酸銨水溶液,渦旋30s,再加5%三氯乙酸-乙腈混合提取液(70:30,V/V)1.85mL,渦旋60s后超聲提取15min,然后以10000rpm轉(zhuǎn)速離心10min,取上清液通過0.22um微孔濾膜,得到提取物溶液,備用;上述待測樣本分別為霜膏、乳液、水劑以及面膜。
2、試樣測定
用自動進(jìn)樣器準(zhǔn)確吸取10uL提取物溶液注入高效液相色譜儀,按色譜條件進(jìn)行測定,記錄色譜峰的保留時間和峰面積。杜鵑醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附圖所示,從圖中可以看出杜鵑醇標(biāo)準(zhǔn)品在280nm下檢測到的出峰時間是2.33min。在上述霜膏、乳液、水劑以及面膜化妝品中的出峰情況,結(jié)果顯示,所有化妝品基質(zhì)中均未檢測到杜鵑醇。
參考文獻(xiàn)
[1]蘇州出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術(shù)中心. 一種檢測化妝品中杜鵑醇的方法:CN201410053218.3[P]. 2014-05-14.