1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺(CAM)是治療中樞神經(jīng)藥加巴噴丁的中間體。在1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺合成過程中可能產(chǎn)生一些副產(chǎn)物以及殘留未反應(yīng)的原料、中間體,而這些化學(xué)成分的存在可能對加巴噴丁的合成產(chǎn)生影響。為了保證1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺的質(zhì)量,必須對這些副產(chǎn)物、中間體、原料、降解產(chǎn)物加以控制。本文采用高效液相色譜法對1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺及相關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量檢測進(jìn)行了研究。

分析方法^[1]

1、HPLC儀器與色譜條件

美國Agilent 1100高效液相色譜儀VWD可變波長紫外檢測器);色譜柱:Agilent SB-C18 100A;流動相:磷酸水溶液:乙腈=70:30(pH=1.9);流速:1.0mL/min;柱溫:40℃;檢測波長:210nm;進(jìn)樣量:20ul。

2、試劑與材料

乙腈為色譜純,水為純化水,其他試劑為分析純,樣品1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺由杭州泰華合成藥有限公司生產(chǎn)。對照品:CDA(1,1-Cyclohexane diacetic acid)、CDI(Cyclohexane diacetimide)、1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺(Cyclohexane diacetic acid monoamide)由TEVA公司提供。

3、準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取下列相近質(zhì)量的1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺對照品6份到50mL的容量瓶中用流動相溶液溶解并加入相同體積、相同濃度的 1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺對照品溶液并用流動相溶液稀釋至刻度進(jìn)行回收率檢測,得到以下數(shù)據(jù),從數(shù)據(jù)表明準(zhǔn)確度符合檢測要求(見表1)。

4、精密度

準(zhǔn)確稱取1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺250mg到25mL的容量瓶中用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，并在上述色譜條件下測定，平行測定6次，得到1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺(CAM)、CDA、CDI的面積歸一法含量平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為99.73%、0.009%;0.06%、0.0%;0.21%、4.3%。

5、重現(xiàn)性

取不同的三批1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺樣品用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，在不同的實驗室、不同人員的操作下并在上述相同的色譜條件進(jìn)行檢測得出三批1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺中CAM,CDI,CDA的面積百分含量平均值+偏差的數(shù)據(jù)分別為99.74%±0.01%、0.06%±0.01%、0.20%±0.00%;99.745%±0.005%、0.035%±0.005%、0.225%±0.005%;99.725%±0.005%、0.03%±0.00%、0.245%±0.005%。從此數(shù)據(jù)可以看出本檢測方法具有良好的重現(xiàn)性。同時稱取約250mg的1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺對照品6份用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解依次在上述相同的色譜條件下進(jìn)樣得到CAM、CDA、CDI的面積平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD分別為 13166.2、0.16%;8.2、0.12%;27.1、3.35%,根據(jù)2005年中國藥典雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則并從以上數(shù)據(jù)分析得出此方法符合分析的要求。

6、專屬性

稱取約10mg/mL1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺對照品和供試品(20060905、20061001、20061002)溶液,在上述高效液相色譜方法條件下進(jìn)行檢測。稱取約10mg/mL 1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺對照品4份分別用5%H2O2、0.1mol/HCl、0.1mol/NaOH、H2O溶解稀釋到刻度在90℃的條件下處理24h后檢測得到以下圖譜:從圖譜上可以看出在5%H2O2氧化條件下1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺基本全部氧化產(chǎn)生未知雜質(zhì);在0.1mol/HCl處埋的條件下1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺基本全部轉(zhuǎn)化為CDA、CDI、和一個少量的未知雜質(zhì)、期中按面積百分比算CDI的量更大;在0.1mo/NaOH處理的條件下1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺一部分轉(zhuǎn)化為未知雜質(zhì),而CDA、CDI的量基本不變;而在水中處理后1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺基本轉(zhuǎn)化為CDA、CDI。從以上圖譜可以看出對照品通過酸破壞、堿破壞和氧化破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物都能與CAM、CDA、CDI分離。

7、檢測限和定量限

配制不同濃度的CAM、CDA、CDI對照品用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，在上述高效液相色譜條件下分別進(jìn)樣20uL得到當(dāng)主成份峰的信噪比在10時CAM、CDA、CDI的定量量分別為60.18ng、200.7ng、2.012ng，并且在上述量下分別對CAM、CDA、CDI進(jìn)樣6針得到各自的RSD分別為1.66%、1.79%、1.85%達(dá)到我們所需的定量要求。配制不同濃度的 CAM、CDA、CDI用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，在上述高效液相色譜條件下分別進(jìn)樣20ul得到當(dāng)主成份峰的信噪比在3時CAM、CDA、CDI的最低檢出量分別為6.018ng、80.28ng、0.8048ng。

8、線性

準(zhǔn)確稱取1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺對照品15.046mg/mL用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，并依次用流動相稀釋成10.0236mg/mL、3.0092mg/mL、0.30092mg/mL、0.030092mg/mL、0.0060184mg/mL、0.0030092mg/mL，制成1~7號溶液，并用上述液相色譜條件分別從7號到1號依次進(jìn)樣,以面積(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)作為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。標(biāo)進(jìn)行線性回歸。準(zhǔn)確稱取CDA對照品1.0036mg/mL用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，并依次用流動相稀釋成0.20072mg/mL、0.10036mg/mL、0.40144mg/mL、0.020072mg/mL、0.010036mg/mL,制成1~5號溶液，并用上述液相色譜條件分別從5號到1號依次進(jìn)樣,以面積(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)作為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。準(zhǔn)確稱取CDI對照品0.2012mg/mL用流動相溶液稀釋到刻度超聲溶解，并依次用流動相稀釋成0.1006mg/mL、0.01006mg/mL、0.002012mg/mL、0.001006mg/mL、0.0001006mg/mL,制成1~6號溶液,并用上述液相色譜條件分別從6號到1號依次進(jìn)樣，以面積(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)作為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，線性良好。

9、耐用性

本實驗曾采用多種不同廠家,不同型號的ODS色譜柱檢測1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺的相關(guān)物質(zhì)，結(jié)果顯示所得的CAM、CDA、CDI的面積歸一法百分含量數(shù)據(jù)相差很小,分離度基本一致;少量改變流動相的比例和pH值,結(jié)果不影響分析結(jié)論且分離度影響也比較小。稱取約10mg/mL CAM、CDA在不同的紫外波長下進(jìn)行檢測,1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺隨著波長的減小而增大，考慮波長過低流動相可能產(chǎn)生干擾，而CDA在210nm左右有最大吸收,因此波長選為210nm。

參考文獻(xiàn)

[1]柏挺,陳良平. 1,1-環(huán)己基二乙酸單酰胺及相關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜分析[J]. 浙江化工,2007,38(7):32-34. DOI:10.3969/j.issn.1006-4184.2007.07.013.