簡介

Cyclo(RGDFK) 是一種環(huán)狀五肽，由精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸（Arg-Gly-Asp-Phe-Lys）通過頭尾酰胺鍵環(huán)化而成，外觀為白色至類白色凍干粉末，無臭，易吸濕。該化合物常溫下穩(wěn)定，但需避光、低溫（–20 °C）干燥保存。長期需冷凍干燥并充氮密封，避免反復凍融及強酸強堿。

CYCLO (RGDFK)的性狀

合成

在聚乙烯多肽合成容器中手動進行多肽合成，其底部有一個熔塊，頂部有一個用于添加試劑的隔膜的螺旋蓋。用抽吸除去溶劑和可溶性試劑。洗凈之間的混合物去保護。用DMF（4 × 1分鐘）、DCM （4 × 1分鐘）、IPA（4 × 1分鐘）進行混合。用20%哌啶/DMF治療Fmoc組（2 × 7分鐘）。在固相反應(yīng)器中稱取Wang樹脂（0.1 mmol）。用DMF，DCM和IPA清洗樹脂。將混合物在DCM中膨脹1小時。激活第一個氨基酸N-a-Fmoc-Leu（234 mg， 4個等量），DCB （57 mL，4個等量），吡啶（54 mL，6個等量）5分鐘。將活化的氨基酸加入膨脹的樹脂中。將反應(yīng)混合過夜。用胡椒堿edmf溶液（1:4）去除第一個氨基酸的Fmoc保護基團。通過在DMF中連續(xù)添加受保護的氨基酸（2個等量）、BOP（86 mg，1.95等量）、HOBt （27 mg，2等量）和NMM （50 mL，4.5等量），使用標準Fmoc程序組裝線性肽1-2小時。加入最后一個氨基酸后，用20%哌啶在DMF中除去n端Fmoc基團（2 × 10分鐘）。用DMF和IPA清洗樹脂。用TFA-TIPS-H2O（95:2.5:2.5, 7.5 mL）從樹脂上切割肽。將所得混合物攪拌2小時，然后用TFA: CH2Cl2（1:9, 7 mL）洗滌。將酸洗液濃縮至約1ml。用冷卻的乙醚沉淀混合物。通過離心收集沉淀物。用冰冷的干乙醚（4 × 30 mL）洗滌沉淀。分離沉淀物。在氮氣流中干燥沉淀物。將混合物冷凍干燥。用制備型高效液相色譜法純化粗產(chǎn)物。將Fmoc-Asp-OAll（119mg，3等量）和DIPEA（210ml，12等量）溶液加入干CH2Cl2至2-氯三烷基樹脂（0.1 mmol）中。蓋上樹脂。移除Fmoc保護組。使用標準的Fmoc程序組裝線性五肽。加入最后一個氨基酸后，用Pd(PPh3)4（0.16當量）和PhSiH3（16當量）在DCM/DMF中處理2小時，去除c端烯丙基酯。用二乙基二硫代氨基甲酸鈉鹽洗滌反應(yīng)混合物。用piperidineeDMF（1:4）去除n端Fmoc組，然后在DMF中加入BOP(1.95等量，86 mg), HOBt （27 mg，2等量）和NMM（50 mL，4.5等量）2小時，使樹脂環(huán)化并得到環(huán)化肽。用TFA:CH2Cl2（1:1, 8ml）處理混合物2小時。用TFA:CH2Cl2（1:9）洗滌混合物得到標題化合物CYCLO (RGDFK)[1]。

參考文獻

[1] Decoration of polymeric micelles with cancer-specific peptide ligands for active targeting of paclitaxel. By: Shahin, Mostafa; et al. Biomaterials (2011), 32(22), 5123-5133.