柱層析就是通常所說(shuō)的過(guò)柱子，又叫柱色譜，屬于色譜法中使用最廣泛的一種方法。對(duì)于含有多種有機(jī)物的混合樣品，用重結(jié)晶無(wú)法提純時(shí)， 柱層析法可以說(shuō)是有機(jī)實(shí)驗(yàn)中最有效的分離手段。實(shí)驗(yàn)室中常用的是以硅膠粉做固定相的吸附柱。分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而得到分離，一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附， 整個(gè)層析過(guò)程即是吸附、 解吸、 再吸附、 再解吸過(guò)程。

用多少硅膠粉？

初做柱層析很容易把柱子裝得長(zhǎng)了或短了，有時(shí)還會(huì)有大量的硅膠剩余，浪費(fèi)硅膠，這主要是對(duì)硅膠等固定相的使用的量沒(méi)有掌握。柱層析用的硅膠粉一般是 100-200 目或300-400 目，100 毫升硅膠粉的質(zhì)量在47 克左右，如果裝一個(gè)直徑是 2.8 厘米的柱子，可以裝 18 厘米高。

為了避免浪費(fèi)硅膠和溶劑，最初學(xué)習(xí)裝柱時(shí)最好對(duì)實(shí)驗(yàn)室中各種不同規(guī)格的柱子摸摸底。方法很簡(jiǎn)單：用量筒量出 100 毫升干硅膠， 直接倒入各種規(guī)格的柱子中，敲實(shí)，用刻度尺量出硅膠在柱子中的高度，這樣就可以做到心中有數(shù)了。

一般在裝柱的時(shí)候可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需柱子的高度來(lái)調(diào)整硅膠的使用量，這樣就可以大大地節(jié)省硅膠的使用，避免造成沒(méi)有必要的浪費(fèi)。稱(chēng)量硅膠時(shí)一般稱(chēng)30~70倍于上樣量， 如果極難分， 也可以用100 倍量以上的硅膠粉。

如何裝柱？

柱層析的裝柱非常重要，裝柱的效果會(huì)直接影響層析分離效果。有濕法裝柱和干法裝柱等兩種方法。

濕法裝柱很簡(jiǎn)單，使用也最普遍， 就是先用比硅膠粉（固定相）多一倍的洗脫劑將固定相活成勻漿，柱子底部先用脫脂棉塞緊， 然后倒入洗脫劑將脫脂棉中氣泡趕出。用漏斗將活好的固定相倒入柱子中， 打開(kāi)底部活塞， 將柱子中高出固定相的溶劑放出。期間不斷用橡皮棒敲打， 將固定相敲實(shí)， 做到密實(shí)均勻無(wú)氣泡即可。

干法裝柱與濕法裝柱剛好相反的是，它是將干燥的吸附劑從柱子上端直接加入到一個(gè)空的柱子中， 然后用油泵抽柱子底部， 相當(dāng)于減壓過(guò)柱， 直到柱子變得很結(jié)實(shí)， 再用淋洗劑“走柱子” 。干法裝柱的一個(gè)缺點(diǎn)就是在裝入洗脫劑后， 由于溶劑和硅膠粉之間的吸附放熱， 所以柱子容易變花，影響分離效果。