腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBGA)是一種用于食品、水質(zhì)等樣品中腸道菌計(jì)數(shù)的選擇性培養(yǎng)基,其核心特點(diǎn)是利用結(jié)晶紫和膽鹽抑制雜菌,同時(shí)通過(guò)葡萄糖發(fā)酵指示劑顯色來(lái)鑒別目標(biāo)菌。

核心成分與原理

每升腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的典型配方如下:7.0、3.0g 蛋白胨、酵母浸粉,提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子。10.0g 葡萄糖,作用為發(fā)酵糖類,用于產(chǎn)酸檢測(cè)。5.0g 氯化鈉,用于維持滲透壓平衡。1.5、0.002g 3號(hào)膽鹽、結(jié)晶紫,抑制革蘭氏陽(yáng)性菌等非目標(biāo)菌。0.03g 中性紅,作為pH指示劑(酸性變紅,堿性為黃色)。12.0 - 13.0g 瓊脂,培養(yǎng)基凝固劑。

檢測(cè)原理:腸道菌可發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,使培養(yǎng)基pH下降,導(dǎo)致指示劑中性紅變色,從而形成粉紅色或紅色菌落。膽鹽和結(jié)晶紫則共同作用,抑制非目標(biāo)菌生長(zhǎng),保證選擇性。

質(zhì)量控制

腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂在接種標(biāo)準(zhǔn)菌株后,在36±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí),應(yīng)呈現(xiàn)如下典型特征,大腸埃希氏菌呈紅色或粉紅色菌落,可有沉淀環(huán)。沙門(mén)氏菌是無(wú)色或琥珀色菌落。

注意事項(xiàng)

腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂的煮沸時(shí)間需要嚴(yán)格控制在2分鐘以內(nèi),過(guò)度加熱會(huì)降低選擇性并影響凝膠效果。避免高壓滅菌,培養(yǎng)基中的糖類和指示劑在高溫高壓下會(huì)被破壞,因此只能通過(guò)煮沸滅菌。

使用標(biāo)準(zhǔn)

腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂其使用標(biāo)準(zhǔn)參考GB 4789.3-2025《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》,規(guī)定了兩種主要方法。平板計(jì)數(shù)法: 使用 VRBA(結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂)。大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,在VRBA上形成紫紅色菌落,周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)^[1]。MPN法(最可能數(shù)法): 使用LST(月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯)和BGLB(煌綠乳糖膽鹽肉湯)進(jìn)行發(fā)酵確證^[1]。VRBGA與VRBA的區(qū)別:腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBGA)的碳源是葡萄糖,而另一種常見(jiàn)培養(yǎng)基“結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)”的碳源是乳糖。VRBGA用于計(jì)數(shù)所有能發(fā)酵葡萄糖的腸道菌,范圍更廣。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)、國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.GB 4789.3-2025《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》[S].中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社.2025.