簡介

GBC-SD是一種常用的人膽囊癌細胞系，可用于膽囊癌的體外生物學(xué)行為研究。該細胞可在含胎牛血清的完全培養(yǎng)基中常規(guī)復(fù)蘇、貼壁培養(yǎng)，通過siRNA轉(zhuǎn)染、細胞劃痕及Transwell等實驗，可用于探究SOCS3等關(guān)鍵基因?qū)δ[瘤細胞遷移、侵襲能力的調(diào)控作用，是研究膽囊癌發(fā)生發(fā)展機制及潛在干預(yù)靶點的重要體外模型。

GBC-SD（人膽囊癌細胞）的性狀

培養(yǎng)方法

(1)GBC-SD（人膽囊癌細胞）培養(yǎng)實驗室、潔凈工作臺、微量移液器、無菌巴氏吸管、培養(yǎng)瓶、15mL無菌離心管等試驗常規(guī)用物紫外燈照射1小時。(2)在37℃水浴中預(yù)熱含有10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基5-10分鐘。用75%酒精消毒細胞培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基瓶和其他材料，并將其放入無菌操作站備用。(3)從液氮中取出GBC-SD（人膽囊癌細胞）冷凍管，然后快速放入37℃水浴中。繼續(xù)快速搖動冷凍管以促進冷凍保存溶液在1分鐘內(nèi)快速融化。(4)用75%酒精消毒冷凍管，并將其放入潔凈工作臺。打開冷凍管，用無菌巴斯德吸管快速均勻地吸取細胞懸液，轉(zhuǎn)移到15mL無菌離心管中，立即加入10mL新鮮的37℃預(yù)熱的完全培養(yǎng)基。擰緊管蓋用封口膜加固。(5)室溫下900轉(zhuǎn)每分鐘離心3min后，倒去全部培養(yǎng)基后加入5mL新鮮培養(yǎng)基，將細胞懸液吹打混勻后轉(zhuǎn)入25cm2培養(yǎng)瓶中，瓶口過酒精燈火焰3-5秒，再次消毒瓶身后置于37.0℃，含5%CO?培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)，再次消毒、整理實驗用物。(6)24小時后，觀察GBC-SD（人膽囊癌細胞）貼壁及成活情況，及時更換新培養(yǎng)基[1]。

GBC-SD（人膽囊癌細胞）的遷移、侵襲能力

研究人員通過細胞劃痕實驗發(fā)現(xiàn)，用有效的siRNA片段干擾調(diào)控GBC-SD（人膽囊癌細胞）的SOCS3的表達后，實驗干擾調(diào)控組細胞的遷移能力較對照組明顯下降，重復(fù)實驗結(jié)果一致。進一步在細胞siRNA轉(zhuǎn)染48小時后進行Transwell實驗，分別進行細胞計數(shù)后以每個小室種植20000個細胞，24小時后進行染色、拍照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有效干擾調(diào)控人膽囊癌細胞中SOCS3的表達水平后膽囊細胞的侵襲能力下降。這說明在GBC-SD（人膽囊癌細胞）中SOCS3水平的改變可以影響腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，且有可能在膽囊癌細胞中起到促進腫瘤的作用，這與目前大多數(shù)的研究發(fā)現(xiàn)不一致。目前研究發(fā)現(xiàn)認為SOCS3蛋白是JAK/STAT3通路重要的負調(diào)控抑制劑，在肝癌、胃癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤中呈低表達狀態(tài)，在這些腫瘤的發(fā)展中發(fā)現(xiàn)了這種負調(diào)節(jié)機制的作用[1]。

參考文獻

[1] 楊松林. SOCS3對人膽囊癌細胞GBC-SD侵襲、遷移影響及機制研究[D]. 昆明醫(yī)科大學(xué), 2019. DOI:10.27202/d.cnki.gkmyc.2019.000388.