簡(jiǎn)介

GBC-SD是一種常用的人膽囊癌細(xì)胞系，可用于膽囊癌的體外生物學(xué)行為研究。該細(xì)胞可在含胎牛血清的完全培養(yǎng)基中常規(guī)復(fù)蘇、貼壁培養(yǎng)，通過(guò)siRNA轉(zhuǎn)染、細(xì)胞劃痕及Transwell等實(shí)驗(yàn)，可用于探究SOCS3等關(guān)鍵基因?qū)δ[瘤細(xì)胞遷移、侵襲能力的調(diào)控作用，是研究膽囊癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制及潛在干預(yù)靶點(diǎn)的重要體外模型。

GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）的性狀

培養(yǎng)方法

(1)GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室、潔凈工作臺(tái)、微量移液器、無(wú)菌巴氏吸管、培養(yǎng)瓶、15mL無(wú)菌離心管等試驗(yàn)常規(guī)用物紫外燈照射1小時(shí)。(2)在37℃水浴中預(yù)熱含有10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基5-10分鐘。用75%酒精消毒細(xì)胞培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基瓶和其他材料，并將其放入無(wú)菌操作站備用。(3)從液氮中取出GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）冷凍管，然后快速放入37℃水浴中。繼續(xù)快速搖動(dòng)冷凍管以促進(jìn)冷凍保存溶液在1分鐘內(nèi)快速融化。(4)用75%酒精消毒冷凍管，并將其放入潔凈工作臺(tái)。打開(kāi)冷凍管，用無(wú)菌巴斯德吸管快速均勻地吸取細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)移到15mL無(wú)菌離心管中，立即加入10mL新鮮的37℃預(yù)熱的完全培養(yǎng)基。擰緊管蓋用封口膜加固。(5)室溫下900轉(zhuǎn)每分鐘離心3min后，倒去全部培養(yǎng)基后加入5mL新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液吹打混勻后轉(zhuǎn)入25cm2培養(yǎng)瓶中，瓶口過(guò)酒精燈火焰3-5秒，再次消毒瓶身后置于37.0℃，含5%CO?培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)，再次消毒、整理實(shí)驗(yàn)用物。(6)24小時(shí)后，觀察GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）貼壁及成活情況，及時(shí)更換新培養(yǎng)基[1]。

GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）的遷移、侵襲能力

研究人員通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用有效的siRNA片段干擾調(diào)控GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）的SOCS3的表達(dá)后，實(shí)驗(yàn)干擾調(diào)控組細(xì)胞的遷移能力較對(duì)照組明顯下降，重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。進(jìn)一步在細(xì)胞siRNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)，分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后以每個(gè)小室種植20000個(gè)細(xì)胞，24小時(shí)后進(jìn)行染色、拍照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有效干擾調(diào)控人膽囊癌細(xì)胞中SOCS3的表達(dá)水平后膽囊細(xì)胞的侵襲能力下降。這說(shuō)明在GBC-SD（人膽囊癌細(xì)胞）中SOCS3水平的改變可以影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，且有可能在膽囊癌細(xì)胞中起到促進(jìn)腫瘤的作用，這與目前大多數(shù)的研究發(fā)現(xiàn)不一致。目前研究發(fā)現(xiàn)認(rèn)為SOCS3蛋白是JAK/STAT3通路重要的負(fù)調(diào)控抑制劑，在肝癌、胃癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤中呈低表達(dá)狀態(tài)，在這些腫瘤的發(fā)展中發(fā)現(xiàn)了這種負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制的作用[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊松林. SOCS3對(duì)人膽囊癌細(xì)胞GBC-SD侵襲、遷移影響及機(jī)制研究[D]. 昆明醫(yī)科大學(xué), 2019. DOI:10.27202/d.cnki.gkmyc.2019.000388.