刺五加葉中是兩頭尖中重要的活性成分，但目前對其抗氧化活性研究較少，本文以刺五加葉中作為研究對象，采用電子自旋共振儀探究其對于烷基自由基、羥基自由基和DPPH自由基的清除作用。同時以Vero細(xì)胞作為研究模型，研究其對過氧化氫誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞的保護(hù)作用及其對細(xì)胞內(nèi)活性氧生成速率的影響，探討刺五加葉中的抗氧化作用，為深入研究刺五加葉中抗氧化的機制奠定基礎(chǔ)。

結(jié)構(gòu)鑒定

刺五加葉中為白色無定型粉末，無臭無味。采用JEOL JNM-ECP 600MHz核磁共振光譜儀測定，以C5D5N為溶劑。¹H-NMR譜δ1.25 (s,3H,CH3),1.18(s,3H,CH3),1.11 (3H,s,CH3),1.11(3H,s,CH3)，0.88(s,9H,3個CH3)。1.65,1.74(各3H，d,J=5.9Hz和J=5.05Hz，鼠李糖的CH3)，4.90(1H,d,J-7.0Hz端H),4.77(1H，d,J=6.2Hz，端基H)，5.41(1H,brs,C₁₂-H)，5.93,6.21(各1H,brs，鼠李糖的端基H)，6.28 (1H，d,J=7.6Hz，端基H)[1]。

活性研究^[1]

1、刺五加葉中清除烷基自由基、羥基自由基、DPPH自由基的活性研究

刺五加葉中清除烷基自由基活性半數(shù)抑制濃度IC₅₀為0.123mg?mL^-1，羥基自由基活性半數(shù)抑制濃度IC₅₀為0.204mg?mL^-1, DPPH自由基活性半數(shù)抑制濃度IC₅₀為0.439mg?mL^-1。本實驗表明兩頭尖總皂苷具有良好的抗氧化作用。

2、刺五加葉中對過氧化氫誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞的保護(hù)作用

在前期預(yù)實驗過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)刺五加葉中濃度<100ug·mL^-1時對Vero細(xì)胞沒有明顯的毒性。因此，在本實驗中給藥濃度控制在100ug?mL^-1以下。采用MTT法檢測不同濃度的刺五加葉中對1mM的過氧化氫誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。實驗結(jié)果表明，過氧化氫減少細(xì)胞存活率至39.79%，然而刺五加葉中處理組在濃度分別為25ug?mL^-1、50ug?mL^-1和100ug?mL^-1時其細(xì)胞存活率分別為42.20%、52.29%和55.11%。其IC₅₀值為(52.29±1.87)ug?mL^-1。本實驗說明刺五加葉中對于過氧化氫誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞氧化損傷具有良好的保護(hù)作用且呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。

3、刺五加葉中對過氧化氫誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞的活性氧生成率的研究

本實驗采用DCFH-DA熒光法檢測Vero細(xì)胞中的活性氧生成率。實驗結(jié)果表明，當(dāng)Vero細(xì)胞采用過氧化氫誘導(dǎo)后，細(xì)胞內(nèi)活性氧生成率明顯隨著刺五加葉中濃度的增加而減少。本實驗說明刺五加葉中對于過氧化氫誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞中活性氧的生成具有抑制作用且呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉鑫,溫健,李劍男. 常春藤皂苷B抗氧化活性研究[J]. 長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2023,39(5):515-518. DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2023.05.011.