背景技術(shù)
亞甲基二膦酸(MDP)是雙磷酸類(lèi)藥物，在臨床上主要用于檢查骨骼的血供和代謝方面的病變;經(jīng)99TcO4-標(biāo)記后的產(chǎn)品(云克)用作類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等疾病的治療劑。由于亞甲基二磷酸生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)引入一些雜質(zhì),這些雜質(zhì)(特別是亞磷酸)的存在可能會(huì)影響藥物臨床用藥的安全有效性,而且其用量也是嚴(yán)格控制的,因此亞甲基二磷酸原料藥中亞磷酸含量分析是質(zhì)量控制中的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
亞甲基二磷酸屬雙磷酸類(lèi)藥物,是一種焦磷酸類(lèi)似物,是將后者的P-O-P連接用P-C-P連接代替。由于其結(jié)構(gòu)中無(wú)生色團(tuán),極性也較強(qiáng),因此該類(lèi)藥物的質(zhì)量控制一般采用重量分析法、酸堿滴定法、絡(luò)合滴定法和分光光度法、柱前或柱后衍生反相高效液相色譜法等方法。這幾種分析方法的缺點(diǎn)是特異性較差,其中柱前或柱后衍生法較繁瑣,而且僅能檢測(cè)到雙磷類(lèi)藥物,而不能對(duì)其分解產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè);其他幾種方法的特異性較差。本研究擬采用反相短碳鏈C8色譜柱以減少雙膦酸在柱上的吸附,配以通用型蒸發(fā)光散射器代替?zhèn)鹘y(tǒng)的紫外檢測(cè)器對(duì)各相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),以解決亞甲基二磷酸及相關(guān)物質(zhì)的分離及檢測(cè)問(wèn)題。
檢測(cè)方法[1]
1、色譜條件
色譜柱:Symmetry C8色譜柱(150mmX4.6mm,5um):Waters公司;流動(dòng)相:V(30mmol/L正戊胺(用乙酸調(diào)節(jié)pH5.0)):V(甲醇)=98:2;流速:1mL/min。
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD):漂移管溫度110℃,氣體流量:2.7L/min;撞擊器位置:off,增益:1。在上述條件下,亞甲基二磷酸的理論塔板數(shù)為2141,分離度為10.4,拖尾因子0.97。
2、檢測(cè)步驟
分別將磷酸二氫鈉、亞磷酸、亞甲基二磷酸對(duì)照品進(jìn)樣至高效液相色譜系統(tǒng)，采用反相高效液相色譜法分析其亞甲基二磷酸含量,確定樣品的保留時(shí)間。在相同條件下對(duì)亞甲基二磷酸原料進(jìn)行反相高效液相色譜分析。
3、線性范圍
亞甲基二磷酸在600~4000mg/L范圍內(nèi)峰面積A的對(duì)數(shù)值IgA濃度C對(duì)數(shù)值lgC呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為:lgA=1.9436 IgC+16.212,r=0.9996,檢出限為200mg/L。
4、精密度與重復(fù)性
在優(yōu)化色譜條件下,取濃度為2.07g/L的亞甲基二磷酸對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,亞甲基二磷酸峰面積的相對(duì)偏差為1.07%。
5、回收率
取濃度為920mg/L和299mg/L亞甲基二磷酸對(duì)照品溶液,按兩點(diǎn)法進(jìn)樣進(jìn)行色譜分析,并對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行線性回歸,另外配制3個(gè)已知濃度的亞甲基二磷酸對(duì)照品溶液,做空白加樣回收,回收率為98%~102%，符合檢測(cè)要求。
6、樣品測(cè)定
采用兩點(diǎn)法進(jìn)樣，對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)量,結(jié)果亞甲基二磷酸質(zhì)量含量為95.0%~98.1%，符合檢測(cè)要求。
參考文獻(xiàn)
[1] 趙秀巖,王曉靜,付博,等. 高效液相色譜法測(cè)定亞甲基二磷酸含量[J]. 同位素,2012,25(1):33-36.