研究背景
DL-酪氨酸是酪氨酸的消旋體，包含?L-酪氨酸?（天然存在形式）和?D-酪氨酸?（非天然異構(gòu)體）兩種形式。DL-酪氨酸屬于芳香族非必需氨基酸，是腎上腺素、去甲腎上腺素及多巴胺的前體物質(zhì)，主要參與?蛋白質(zhì)合成、神經(jīng)遞質(zhì)代謝?等過程。目前，市面上售賣的相關(guān)產(chǎn)品性狀為白色結(jié)晶粉末，穩(wěn)定性較好。
生產(chǎn)方法
生物化學(xué)領(lǐng)域公開了一種酶法生產(chǎn)DL-酪氨酸的方法，包括以下步驟：S1，構(gòu)建重組表達載體pET32a-PH0138，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)/pGKJE8中，獲得重組工程菌BBAR；S2，發(fā)酵表達BAR酶的重組工程菌BBAR獲得濕菌體；S3，將濕菌體混懸后進行破碎處理，破碎液為含有廣譜型氨基酸消旋酶的粗酶液；S4，向步驟S3獲得的粗酶液中添加L-酪氨酸和PLP，攪拌轉(zhuǎn)化，直至比旋光度為0°時終止反應(yīng)即可獲得DL-酪氨酸水溶液。該方法具有原料價格低廉，轉(zhuǎn)化率高，后處理簡便的優(yōu)勢，產(chǎn)品質(zhì)量高，適合工業(yè)化大生產(chǎn)[1]。
檢測方法
方法一
在甲醛存在下，高錳酸鉀與 DL-酪氨酸能夠發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生很強的化學(xué)發(fā)光。據(jù)此采用流動注射技術(shù)可以建立一種測定 DL-酪氨酸的化學(xué)發(fā)光分析法。該方法的檢出限為 2.9×10-8 g/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%(1.0×10 -6 g/mL DL-酪氨酸，n=11)，線性范圍為 1.0×10-7g/mL~5.0×10-6 g/mL[2]。
方法二
利用循環(huán)伏安法(CV)將孔雀 石綠(MG)修飾于玻碳電極(GCE)表面，制備得到聚孔雀石綠薄膜修飾電極(簡稱PMGE)。利用循環(huán)伏安法，研究了PMGE對DL-酪氨酸電催化作用， 建立了一種對DL-酪氨酸進行定量分析的新方法。在0.2mol/LKH2PO4-Na2HPO4(pH=6.86)緩沖溶液中，DL-酪氨酸的濃度在 6.3×10-5mol/L~3.2×10-4mol/L范圍內(nèi)與氧化峰電流呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)γ=-0.9989，檢測限可達 8.0×10-6mol/L。8次樣品平行測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.1%，樣品回收率在98.2%~105.3%之間，可用于實際樣品中DL-酪 氨酸的定量分析[3]。
應(yīng)用
以DL-酪氨酸為原料，經(jīng)酶法可得手性D-酪氨酸。具體地，先將DL-酪氨酸與?；噭┰谟袡C酸條件下?；磻?yīng)制備N-乙酰-DL-酪氨酸，將N-乙酰-DL-酪氨酸和去離子水配制成0.5-1.0mol/L的溶液，用堿調(diào)節(jié)pH值,過濾后得到N-乙酰-DL-酪氨酸溶液，該溶液通過固定有D-?；饷傅拿钢?，反應(yīng)后洗脫，反應(yīng)液用脫色劑脫色，過濾，濃縮，冷卻，結(jié)晶，并用少量去離子水漂洗，經(jīng)干燥得到D-酪氨酸，結(jié)晶母液可制備L-酪氨酸。上述由DL-酪氨酸酶法制備D-酪氨酸的工藝可用于大批量工業(yè)生產(chǎn)[4]。
有關(guān)研究
電化學(xué)領(lǐng)域，用吸附法將C-十一烷基間苯二酚杯[4]芳烴固定在玻碳電極上制成杯芳烴膜電極，對DL-去甲腎上腺素，尿酸，DL-酪氨酸，鄰苯二酚進行了測定，該電極對DL-去甲腎上腺素和鄰苯二酚具有良好的響應(yīng)，其線性范圍分別為4.0×10-5～8.0×10-4和2.0×10-4～2.0×10-3mol·L-1，檢測下限分別為1.25×10-5和1.0×10-5mol·L-1，對尿酸，DL-酪氨酸沒有響應(yīng)，試驗發(fā)現(xiàn)杯芳烴膜電極不但具有選擇性，而且有較快的響應(yīng)速度，良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性[5]。
參考文獻
[1]李晚軍,曾帥,劉鵬,et al.酶法生產(chǎn)DL-酪氨酸的方法及廣譜型氨基酸消旋酶,應(yīng)用:CN202110290551.6[P].
[2]何云華,王志銀.流動注射化學(xué)發(fā)光法測定DL-酪氨酸[J].分析試驗室, 2002.DOI:CNKI:SUN:FXSY.0.2002-03-022.
[3]孫元喜,丁穎,周谷珍.利用聚孔雀石綠薄膜修飾電極測定DL-酪氨酸[J].湖南文理學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版, 2009, 21(1):4.DOI:10.3969/j.issn.1672-6164.2009.01.011.
[4]馬云峰,柴多里,王組元.酶法制備D-酪氨酸的方法:CN200610082015.2[P].
[5]高孟姣,張曉嵐,應(yīng)太林,等.杯芳烴膜電極研究[J].理化檢驗-化學(xué)分冊, 2001, 037(001):7-9.DOI:CNKI:SUN:LHJH.0.2001-01-002.