簡述

SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）是源自人骨髓的神經(jīng)母細胞瘤亞克隆細胞，具有與人體神經(jīng)元相似的形態(tài)和生物學(xué)特性 。該細胞可通過多種分化方案轉(zhuǎn)化為成熟神經(jīng)元樣細胞，例如，將其在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)至一定融合度，進行消化，獲得細胞懸液；將細胞懸液鋪板于培養(yǎng)皿以誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)即可獲得多巴胺能神經(jīng)元，并可以分泌多巴胺。在優(yōu)化條件下，多巴胺能神經(jīng)元分化率約為15%，誘導(dǎo)出的DAT陽性細胞占總細胞數(shù)量的5%，分化率高，分化水平高^[1]。

興奮性毒損傷的機制研究

為了探討谷氨酸導(dǎo)致SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）興奮性毒損傷的機制。研究人員通過MTT法檢測SHSY-5Y細胞存活率；測定乳酸脫氫酶釋放量觀察細胞損傷程度；DAPI染色法觀察細胞凋亡形態(tài)學(xué)特點；鈣流法檢測胞漿鈣離子濃度變化；以胞內(nèi)谷胱甘肽、超氧化物歧化酶活性和胞外丙二醛含量檢測谷氨酸引發(fā)SH-SY5Y細胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)。結(jié)果，谷氨酸導(dǎo)致SH-SY5Y細胞受損，包括存活率下降、乳酸脫氫酶釋放量增多及形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變;谷氨酸處理 20 min 后,胞漿鈣離子濃度無顯著改變,而處理 24 h 后,胞漿鈣離子大量增加，且 MK801 (NMDA受體拮抗劑)及LY341495 (代謝型谷氨酸受體拮抗劑)均不能抑制鈣離子內(nèi)流的增多；谷氨酸可導(dǎo)致SH-SY5Y氧化損傷，包括胞內(nèi)谷胱甘肽含量減少、超氧化物歧化酶活性降低、胞外脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛水平升高等，而丹參酮IIA (一種抗氧化劑)可減輕這些氧化損傷。也就是說，谷氨酸導(dǎo)致SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）興奮性毒損傷可能是通過氧化損傷產(chǎn)生的，而不依賴于 NMDA 受體介導(dǎo)的鈣穩(wěn)態(tài)的破壞^[2]。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響研究

為了研究β-淀粉樣蛋白(Aβ(25~35))對SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）凋亡過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響，探討在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過程中未折疊蛋白質(zhì)反應(yīng)途徑(UPR pathway)在凋亡中的作用。研究人員將處于對數(shù)生長期的細胞分別暴露于含0(對照)，5，10，20，30，,40μmol/L Aβ(25~35)的培養(yǎng)基染毒48 h，采用CCK8法檢測細胞活性。將對數(shù)生長期的細胞分別暴露于含0(對照)，5，10，15μmol/L Aβ(25~35)的培養(yǎng)基染毒24，48和72 h。采用流式細胞儀檢測細胞凋亡率，采用Western blotting法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子伴侶葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化轉(zhuǎn)錄因子-6(ATF-6)，蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)蛋白的表達水平。通過實驗結(jié)果可知： Aβ(25~35)可以誘導(dǎo)SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，導(dǎo)致其發(fā)生凋亡^[3]。

參考文獻

[1]宋振濤,陳恒,曲廷瑜.一種誘導(dǎo)SH-SY5Y細胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的方法.CN201710591673.2.

[2]孫中偉,張藍,竺淑佳,等.谷氨酸致人神經(jīng)母細胞瘤細胞興奮性毒損傷的機制[J].Neuroscience Bulletin, 2010(1):8-16.DOI:10.1007/s12264-010-0813-7.

[3]徐彥吉,張金嬋,任啟智,et al.β-淀粉樣蛋白對人神經(jīng)母細胞瘤細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響[J].環(huán)境與健康雜志, 2017(1).DOI:10.16241/j.cnki.1001-5914.2017.01.009.