葉立德的結(jié)構(gòu)和它作為重要的反應(yīng)中間體在有機(jī)合成中的用途很廣泛，在早期的研究中發(fā)現(xiàn)選擇過渡金屬和卡賓反應(yīng)形成的葉立德方法值得進(jìn)一步研究金屬卡賓形成過程中，幾乎用銅做催化完成反應(yīng)，但銅催化劑應(yīng)用范圍有一定的限制。1937年，Jeyssie等發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)金屬銠催化劑醋酸銠(II)可以有效的催化重氮化合物的分解，銠就成為最有效且最具普遍適應(yīng)性的金屬催化劑。
銠含量的分析通常用焙燒及氫氣還原法、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法、分光光度法熒光法、示波極譜法等，但這些分析方法大多只適用于分析化合物中的金屬總含量，并不能分析化合物本身的含量，且工藝繁瑣、耗時(shí)長、靈敏度低，尚不能滿足醋酸銠的純度測定的要求。為配合制備醋酸銠(II)的技術(shù)攻關(guān)項(xiàng)目，本文研究用高效液相色譜法(HPLC)定量分析醋酸銠配合物純度的方法。
實(shí)驗(yàn)方法[1]
1、醋酸銠(II)溶液的制備
精確稱取醋酸銠(II)對(duì)照品25mg，置于25mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲溶解并定量稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm的微孔過濾膜過濾后，作為對(duì)照品溶液，避光放置。另取批量生產(chǎn)的醋酸銠(II)樣品，加流動(dòng)相適量，60℃超聲溶解并定量稀釋制成每1mL中約含1mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。
2、醋酸銠(II)色譜條件的選擇
根據(jù)樣品的溶解性選用甲醇、乙腈、四氫呋喃等與亞沸水等組合進(jìn)行試驗(yàn)、篩選。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，醋酸銠(II)在C8柱上的保留時(shí)間較短，與其他雜質(zhì)峰難以有效分離，而在C18 柱上的保留時(shí)間較長，分離行為較好。因此選用C18柱作為固定相。 選用乙腈、亞沸水作為流動(dòng)相進(jìn)行組合篩選。 在此流動(dòng)相下發(fā)現(xiàn)樣品峰及雜質(zhì)峰的拖尾因子較大，改用甲醇和亞沸水、乙醇和水作為流動(dòng)相再進(jìn)行篩選及優(yōu)化，雖然樣品主峰有明顯的改善，但是還有拖尾現(xiàn)象。由于醋酸銠(II)溶液為酸性，選擇用磷酸作為收尾劑，可以讓峰形更好，故選用 Agllent ZORBOX C18(250mm×250mm，5μm)柱，以甲醇: 水(pH=3，磷酸調(diào)節(jié))=30:70(V/V)為流動(dòng)相，流速為1mL/min，柱溫為25℃，檢測波長為230nm，進(jìn)樣量為10μL。得到的色譜圖如圖1所示，由圖可知分離度RS=5；醋酸銠(II)的保留時(shí)間tR=5.916min。
結(jié)果
1、醋酸銠(II)的線性關(guān)系
稱取7份不同質(zhì)量的醋酸銠(II)，置25mL的容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻過濾后按選定色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果以色譜峰面積A對(duì)其質(zhì)量濃度ρ進(jìn)行線性擬合，得到的線性方程為：A=5×106＋524737，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9997，線性范圍為0.10~2.00mg/mL。
2、加標(biāo)回收率
準(zhǔn)確稱取同一批次的LLC-1903樣品3份，分別加入一定量的LLC-1903對(duì)照品，溶于25mL容量瓶中用流動(dòng)相配制成溶液，進(jìn)樣后根據(jù)工作曲線得到相對(duì)應(yīng)的濃度，從而測得加標(biāo)回收率。測其平均回收率為100.25%，RSD=0.91%。
3、精密度實(shí)驗(yàn)
精密度指在規(guī)定的測試條件下同一個(gè)均質(zhì)樣品，經(jīng)過多次進(jìn)樣測定所得結(jié)果之間的接近程度， 反應(yīng)了正常測定條件下分析方法的再現(xiàn)程度。取0.4021、1.201及1.632mg/mL共3個(gè)不同濃度的對(duì) 照品溶液，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣10μL，用峰面積(A)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD來表示，醋酸銠的RSD分別為0.55%、0.55%、0.81%，表明精密度良好。
4、系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)
系統(tǒng)的適應(yīng)性試驗(yàn)通常包括理論塔板數(shù)、分離度和重復(fù)性，通常重復(fù)性是系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)中更具實(shí)用意義的參數(shù)。所以我們重復(fù)進(jìn)樣，驗(yàn)證色譜系統(tǒng)的適用性。在線性范圍內(nèi)選取一個(gè)濃度，重復(fù)進(jìn)樣6次，測峰面積的RSD值。準(zhǔn)確稱量25mg的醋酸銠對(duì)照品，用流動(dòng)相溶于25mL的容量瓶中，反復(fù)進(jìn)樣6次后，計(jì)算其峰面積的RSD值為0.91%。
5、實(shí)際樣品測定
稱取醋酸銠不同批次的樣品各25mg，用流動(dòng)相溶解于25mL的容量瓶中，定容，搖勻。在最佳色譜條件下進(jìn)樣，利用其工作曲線，測定不同批次的醋酸銠含量。批號(hào)20190828測得醋酸銠含量為98.8%；批號(hào)20200320醋酸銠含量為99.0%[1]。
參考文獻(xiàn)
[1] 姜婧,余娟,劉桂華,等. 醋酸銠的高效液相色譜分析[J]. 貴金屬,2020,41(z1):199-201. DOI:10.3969/j.issn.1004-0676.2020.z1.035.