尿苷 -5'-三磷酸三鈉鹽(UTP 三鈉鹽)是核苷酸類關(guān)鍵生化試劑,白色粉末,易潮解,不溶于乙醇。主要用作?RNA 轉(zhuǎn)錄原料?及?細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)研究工具?。??
主要用途與功能
1 ?生物合成原料?:細(xì)胞內(nèi) RNA 轉(zhuǎn)錄的直接底物,也是合成 CTP(胞苷三磷酸)的前體。
2 ?信號(hào)傳導(dǎo)研究?:作為細(xì)胞外配體激活 P2Y 受體(如 P2Y2、P2Y4、P2Y6),參與神經(jīng)傳導(dǎo)、炎癥調(diào)節(jié)等過程。
3 醫(yī)藥中間體?:用于合成地夸磷索鈉等核苷酸類藥物,或作為系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)的化學(xué)對(duì)照品。
4 代謝通路研究?:參與糖核苷酸代謝及木糖補(bǔ)救途徑等生化機(jī)制研究。
合成方法
使用Dowex-50W離子交換柱(吡啶鎓型)將無機(jī)焦磷酸的鈉鹽以及核苷二磷酸和三磷酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的吡啶鎓鹽。用稀四丁基氫氧化銨溶液將所得溶液滴定至pH 7.0。通過高真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將反應(yīng)混合物濃縮至原體積的約七分之一。將反應(yīng)混合物凍干。將凍干粉末溶解于乙腈中進(jìn)行干燥。向混合物中加入等量的干燥甲苯。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將溶液濃縮至干(重復(fù)3次)。假設(shè)焦磷酸為二(四丁基銨)鹽。將殘留物置于高真空下1小時(shí)。在氬氣氛圍下取出燒瓶。在4 ?分子篩存在下,將混合物溶解于干燥的二甲基甲酰胺中。在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)前,讓溶液靜置至少1小時(shí)。向5-NMP (Bu4N+)1.7 (0.27 mmol) 或 5' NDP (Bu4N+)2.1 (0.27 mmol) 的溶液中,隨后加入磺酰亞胺唑鹽(0.32 mmol,120 mg)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物 1 分鐘。將該溶液加入到受體(核苷單磷酸、二磷酸和糖磷酸為 0.405 mmol, 焦磷酸和二氟亞甲基雙磷酸鹽為0.54 mmol)及氯化鎂(0.27 mmol,26 mg)的溶液中,該受體溶液溶于4 mL干燥的二甲基甲酰胺中,并在0 °C(冰浴)下分30秒加入。將混合物從冰浴中取出。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。將混合物冷卻至 0 °C(冰?。<尤?50 mM 乙酸三乙基銨緩沖液(5 mL,pH 7.0)淬滅反應(yīng)混合物。用氯仿(3 × 10 mL)洗滌反應(yīng)混合物。向混合物中加入 Chelex 樹脂(約 0.2 g)。攪拌混合物 1 分鐘。通過棉塞過濾混合物。加入水淬滅反應(yīng)混合物,以避免產(chǎn)物沉淀。在氯仿洗滌之前將 Chelex 樹脂加入混合物中。用反相高效液相色譜(RP-HPLC)純化濾液[40分鐘內(nèi)從100%緩沖液(pH 7.0)線性梯度洗脫至5% CH3CN-95%緩沖液],隨后通過Dowex-50-W-Na+離子交換柱。合并含有目標(biāo)產(chǎn)物的各分餾液。通過高真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮產(chǎn)物。將殘留物溶于水中。將產(chǎn)物冷凍干燥。使用 Na+ 型 Dowex-50-W 離子交換樹脂,將所得白色粉末轉(zhuǎn)化為尿苷 -5'-三磷酸三鈉鹽。[1]

參考文獻(xiàn)
[1] Mohamady, Samy; et al Sulfonyl Imidazolium Salts as Reagents for the Rapid and Efficient Synthesis of Nucleoside Polyphosphates and Their Conjugates Organic Letters (2012), 14(1), 402-405