介紹

氯酚紅（Chlorophenol Red, CPR）是一種三苯甲烷類磺酰酞染料，分子式為C??H??Cl?O?S，呈磚紅色結(jié)晶粉末，難溶于水但易溶于乙醇和稀堿溶液。具有敏銳的酸堿響應(yīng)特性，pH變色范圍為4.8（黃色）至6.8（紫紅色），常作為pH指示劑用于細胞培養(yǎng)基監(jiān)測、尿液比重檢測及生化分析；此外，因其可被特定脫氫酶還原褪色，也廣泛用作微生物生長及酶活力檢測的顯色底物。

圖一 氯酚紅

檢測應(yīng)用

以氯酚紅作探針，采用可見光區(qū)褪色分光光度法來研究烏拉地爾的檢測方法。在弱堿性溶液中，烏拉地爾可與氯酚紅反應(yīng)，生成新的物質(zhì)，新物質(zhì)的吸光度絕對值與一定質(zhì)量濃度范圍的烏拉地爾的質(zhì)量濃度服從朗伯-比爾定律。該法用于藥物中烏拉地爾的測定，結(jié)果滿意。

溶液配制

CPR溶液：準確稱取0.423 3g氯酚紅，加20mL無水乙醇溶解后用水稀釋至1 000 mL，即為1.00×10-3 mol/L;URD標準溶液：準確稱取0.023 17g烏拉地爾對照品，加10mL無水乙醇溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用二次蒸餾水定容，配成231.7mg/L貯備液，冰箱4℃保存；臨用時取貯備液用水稀釋配成23.17mg/L操作液。緩沖溶液：pH 3.0～9.8Tris-鹽酸溶液。

URD標準曲線及相關(guān)系數(shù)

取23.17mg/L烏拉地爾0.20～1.40 mL于10mL具塞比色管中，再加入2.00mL 1.0×10-3mol/L氯酚紅溶液和1.00mL pH 7.93Tris-鹽酸緩沖溶液，定容，搖勻，5min后，在U-4100型紫外-可見-近紅外分析儀上掃描吸收光譜（以試劑空白作參比），測定600nm波長處溶液的吸光度（A）。作600nm波長處體系的A-c標準曲線（圖1）。方法的一元線性回歸方程為A=0.000 348 9-0.062 59c(mg/L），回歸系數(shù)（r)=-0.999 8，線性范圍為0～3.7 mg/L，表觀摩爾吸光系數(shù)（κ）為1.44×104 L·mol-1·cm-1。

圖二為烏拉地爾與氯酚紅的吸收光譜圖。在可見光區(qū)，烏拉地爾溶液幾乎無吸收；氯酚紅的弱堿性溶液有較強吸收，最大吸收波長位于572nm。在烏拉地爾溶液中加入氯酚紅溶液（pH7.93）后，溶液紅色變淺，溶液發(fā)生褪色現(xiàn)象，光譜曲線上出現(xiàn)2個明顯的負吸收峰，分別位于600nm（紅移28nm）和548nm（藍移24nm），波移表明，氯酚紅與烏拉地爾在弱堿性條件下發(fā)生反應(yīng)后確實生成了新物質(zhì)。新物質(zhì)的最大負吸收峰是在600nm波長處，次大負吸收峰是548nm，在此兩波長處，當在氯酚紅的弱堿性溶液中加入不同質(zhì)量濃度的烏拉地爾溶液時，體系溶液的吸光度與一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的烏拉地爾（URD）的質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系，并服從朗伯-比爾定律。該方法兩波長處均可用于烏拉地爾的定量測定[1]。

圖二 烏拉地爾與氯酚紅的吸收光譜圖

參考文獻

[1]王潤蓮,江虹,吳文婕.氯酚紅探針可見吸收光譜法測定烏拉地爾[J].化學(xué)世界,2020,61(2):105-109.DOI:10.19500/j.cnki.0367-6358.20180706.