背景^[1-4]

小鼠子宮頸上皮細(xì)胞分離自子宮頸組織；子宮頸位于子宮下部，近似圓錐體，上端與子宮體相連，下端深入陰道。陰道頂端的穹隆又將子宮頸分為兩部分：宮頸突入陰道的部分稱宮頸陰道部，在陰道穹隆以上的部分稱宮頸陰道上部。宮頸的中央為前后略扁的長(zhǎng)梭性管腔，其上端通過(guò)宮頸內(nèi)口與子宮腔相連，其下端通過(guò)宮頸外口開口于陰道。內(nèi)外口之間即宮頸管。宮頸的大小與宮體比例隨年齡及內(nèi)分泌狀態(tài)等而變化；宮頸壁由黏膜、肌層和外膜組成。

上皮細(xì)胞覆蓋于身體表面并襯貼于體內(nèi)空腔器官腔面的細(xì)胞。其排列有明顯極性，一面朝向身體表面或腔面，稱游離面；一面向著深部的結(jié)締組織，稱基底面。上皮細(xì)胞具有強(qiáng)大的角生和更新能力。上皮組織具有保護(hù)、吸收、分泌和排泄等作用。當(dāng)上皮細(xì)胞受損時(shí)，則影響機(jī)體的防御功能。小鼠子宮頸上皮細(xì)胞分離自子宮頸組織；子宮頸為子宮的最下部最細(xì)部，伸入陰道，呈圓柱狀的部分是子宮頸。

子宮頸又可分為上、下兩部，下部突入陰道稱子宮頸陰道部，上部則稱子宮頸陰道上部。子宮頸的內(nèi)腔呈梭形，叫子宮頸管，其上口叫子宮頸管內(nèi)口，與子宮體腔相通;下口叫子宮頸管外口，開口于陰道。宮頸管內(nèi)含有大量分泌腺。這些分泌腺在月經(jīng)周期的各個(gè)階段，分泌不同的粘液，排卵前夕和排卵期，宮頸分泌物稀薄;在其他時(shí)期，分泌物常常粘稠，粘稠的分泌物常常形成粘液栓而起封閉宮頸管外口的自潔作用。排卵期子宮頸粘液稀薄有利于精子通過(guò)和成活。

體外培養(yǎng)的小鼠子宮頸上皮細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。小鼠子宮頸上皮細(xì)胞采用先膠原酶消化、后組織貼塊法，結(jié)合上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-19/PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

應(yīng)用^[4][5]

小鼠子宮頸上皮細(xì)胞提取物可用于水通道蛋白對(duì)子宮頸癌細(xì)胞系的遷移及局部浸潤(rùn)潛能的影響研究：

目前，手術(shù)、放化療是宮頸癌的主要治療手段。對(duì)于早期宮頸癌患者，手術(shù)治療是較為有效的治療方法；但是中晚期宮頸癌患者失去手術(shù)機(jī)會(huì)，不得不采用放化療方法治療，放化療的副作用常常使治療難以繼續(xù)進(jìn)行。浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是宮頸癌療效差、預(yù)后不良的重要因素，因此深入研究宮頸癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的機(jī)制對(duì)其臨床治療具有重要的意義。

為滿足快速增殖、分裂和侵襲轉(zhuǎn)移的需要，腫瘤細(xì)胞內(nèi)一系列酶的活性和表達(dá)會(huì)發(fā)生改變，細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)成分如蛋白質(zhì)、脂類和核酸的合成加強(qiáng)。癌細(xì)胞所有生命活動(dòng)都離不開水的微環(huán)境和參與，它比正常細(xì)胞更需要水分子的快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，同時(shí)癌細(xì)胞向周圍基質(zhì)浸潤(rùn)和進(jìn)出血管（淋巴管）時(shí)需要其體積和細(xì)胞形態(tài)的改變。水通道蛋白（AQPs）是一組能選擇性跨細(xì)胞質(zhì)膜由滲透壓驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的小而完整的糖蛋白，迄今為止共發(fā)現(xiàn)有13個(gè)成員（AQP0-12）。源于基因敲除小鼠的大量研究提示AQPs參與的生理病理功能有尿的濃縮、外分泌腺分泌、腦水腫、神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)、皮膚水分增加、脂肪代謝等。

近期對(duì)AQPs的一些研究提示AQPs參與細(xì)胞的遷移和增殖，可能增強(qiáng)腫瘤的局部侵襲力和通過(guò)血管（淋巴管）轉(zhuǎn)移的能力。本研究應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR（Real-Time PCR，RT-PCR）、免疫熒光及免疫組織化學(xué)初步篩選出在子宮頸癌中特異表達(dá)的AQP1、AQP3、AQP8三個(gè)亞型，選取AQP8基因作為目的基因，然后通過(guò)熒光蛋白標(biāo)記的慢病毒載體轉(zhuǎn)染入SiHa細(xì)胞基因組內(nèi)，分別從AQP8基因過(guò)表達(dá)和表達(dá)沉默兩方面，探討AQP8基因?qū)iHa細(xì)胞遷移、增殖、基質(zhì)貼附及局部浸潤(rùn)的影響。

目的：篩選在子宮頸癌中特異表達(dá)的AQP亞型，探討特異AQP亞型對(duì)子宮頸癌細(xì)胞體外、體內(nèi)遷移增殖、基質(zhì)貼附及局部浸潤(rùn)的影響。通過(guò)水通透性實(shí)驗(yàn)比較四種人子宮頸癌細(xì)胞系SiHa、HeLa、Caski、ME-180水通透性差異，從中選擇水通透性低的細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系，應(yīng)用RT-PCR、免疫熒光篩選子宮頸癌細(xì)胞系中特異表達(dá)的AQP亞型，進(jìn)一步通過(guò)免疫組化篩選子宮頸癌組織中特異表達(dá)的AQP亞型。

參考文獻(xiàn)

[1]5-Aza-dC和放療對(duì)宮頸癌細(xì)胞系的增殖抑制作用與P16、MGMT基因表達(dá)的關(guān)系探討[D].陳觀娣.南方醫(yī)科大學(xué)2018

[2]宮頸癌細(xì)胞系RRM1表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)吉西他濱敏感性的相關(guān)研究[D].焦瀾舟.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)2009

[3]水通道蛋白在維吾爾族婦女子宮頸癌中的差異表達(dá)及其與預(yù)后關(guān)系的研究[D].陳銳.新疆醫(yī)科大學(xué)2012

[4]利用siRNA沉默PCNA研究對(duì)宮頸癌生長(zhǎng)的影響[D].黃浩.華中科技大學(xué)2009

[5]史永華.水通道蛋白對(duì)子宮頸癌細(xì)胞系的遷移及局部浸潤(rùn)潛能的影響研究[D].新疆醫(yī)科大學(xué),2012.