25-羥維生素D3是由膽鈣化醇(維生素D3)在肝臟25-羥化酶誘導(dǎo)下生成的維生素D在體內(nèi)存在的主要形式。它在神經(jīng)膠質(zhì)和神經(jīng)元細(xì)胞中分布很廣，能夠有效降低多巴胺能神經(jīng)元毒性損傷，從而更好地保護(hù)人體的神經(jīng)系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)，測(cè)量25-羥維生素D3可反映人體內(nèi)儲(chǔ)存維生素D的真實(shí)水平，了解體內(nèi)維生素D的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，是早期診斷佝僂病的依據(jù)。

圖1.25-羥維生素D3的結(jié)構(gòu)式

綜合文獻(xiàn)，25-羥維生素D3不僅可以促進(jìn)小腸黏膜對(duì)鈣和磷的吸收，與帕金森患者的睡眠還有關(guān)系。血清中25-羥維生素D3缺乏的帕金森病患者睡眠質(zhì)量、認(rèn)知功能更差，ACTH水平更高，補(bǔ)充含量或許能改善帕金森病患者睡眠質(zhì)量、認(rèn)知功能，降低血清ACTH水平，提高生活質(zhì)量。另外，25-羥維生素D3、脂聯(lián)素還與發(fā)生認(rèn)知功能障礙有關(guān)，或可成為有關(guān)患者認(rèn)知功能障礙的預(yù)測(cè)因子。

采用高效液相色譜(HPLC)法可以測(cè)定血清25-羥維生素D3[25(OH)VitD3]。血清經(jīng)甲醇沉淀蛋白質(zhì)，以二氯甲烷-正己烷溶液提取后進(jìn)行HPLC分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法在10～200μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9971)，日內(nèi)變異系數(shù)(CV)為3.5%～4.4%，日間CV為3.9%～4.7%。該方法回收率為93.4%～106.2%，提取回收率為88.8%～94.1%，具有快速，靈敏，準(zhǔn)確和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定血清25-羥維生素D3濃度。

文獻(xiàn)公開(kāi)了一種檢測(cè)25-羥維生素D3含量的試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。所述試劑盒由彼此獨(dú)立的試劑Ⅰ和試劑Ⅱ組成。其中，試劑Ⅰ的組分包括：25-羥維生素D3-BSA偶聯(lián)物，生物緩沖劑，螯合劑，表面活性劑，促凝劑，防腐劑，穩(wěn)定劑和水。試劑Ⅱ的組分包括：包被25-羥維生素D3抗體的膠乳顆粒，生物緩沖劑，螯合劑，表面活性劑，助懸劑，防腐劑，封閉劑，穩(wěn)定劑和水。本發(fā)明試劑盒檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，定量準(zhǔn)確，線性范圍寬，尤其適用于25-羥維生素D3含量極低樣品的檢測(cè)。此外，該試劑盒在檢測(cè)過(guò)程中不需對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)稀釋，方便臨床使用，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，適用于各種全自動(dòng)生化分析儀。

為探討25-羥維生素D3對(duì)人正常氣道上皮細(xì)胞通透性及ZO-1表達(dá)的影響。 選取正常人支氣管上皮細(xì)胞系16HBE為研究對(duì)象，MTT法分別檢測(cè)不同濃度25-羥維生素D3，對(duì)細(xì)胞活力的影響。實(shí)驗(yàn)分組為：對(duì)照組，不同濃度25-羥維生素D3，處理組。各處理因素作用細(xì)胞總時(shí)間為24 h?？缟掀る娮铚y(cè)量?jī)x測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)化單細(xì)胞層跨上皮電阻(TER)，比較各組TER差別，進(jìn)一步用實(shí)時(shí)定量PCR觀測(cè)各處理組緊密連接蛋白ZO-1 mRNA表達(dá)的變化。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論，25-羥維生素D3可以使氣道上皮通透性減低，但這種效應(yīng)并非通過(guò)上調(diào)氣道上皮ZO-1表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。