Cy5-馬來酰亞胺 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫，是由奇數(shù)個甲基單位連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高、水溶性好、合成相對簡單等特點。CY 系類染料常被用于蛋白，抗體以及小分子化合物的標(biāo)記，對于蛋白抗體的標(biāo)記，可以通過簡單的混合反應(yīng)來完成結(jié)合，以下我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法，具有一定的參考意義。Cy5 (Cyanine 5) 是一種發(fā)遠(yuǎn)紅(far-red)熒光的花青素?zé)晒馊玖?。它的消光系?shù)很高，熒光很亮，并且對pH不敏感，一般可以用633 nm或647 nm的激光束激發(fā)然后用 Cy5或APC濾片觀察，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy5熒光落在遠(yuǎn)紅光區(qū)，使用Cy5或者其它遠(yuǎn)紅光染料的一個重要優(yōu)勢是在這個長波長光譜范圍內(nèi)樣品背景熒光較低，而在這個區(qū)域CCD相機(jī)/檢測器檢測靈敏度最高。Cy5可以用來標(biāo)記蛋白，抗體，多肽，核酸分子，納米粒等。
馬來酰亞胺(maleimide)是生物標(biāo)記反應(yīng)中常用的基團(tuán)，它可以和巰基(-SH)通過親和加成反應(yīng)生成穩(wěn)定的巰醚(thioester)結(jié)構(gòu)從而實現(xiàn)標(biāo)記。盡管胺基(比如賴氨酸精氨酸側(cè)鏈)也有親和性，但在中性或微酸性緩沖液中，馬來酰亞胺選擇性標(biāo)記巰基(反應(yīng)速度比胺基快>1000倍)。標(biāo)記反應(yīng)反應(yīng)迅速，選擇性高，產(chǎn)率好，另外，巰基是一種在生物分子中廣泛存在的官能團(tuán)，比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和雙硫鍵等，因此馬來酰亞胺/巰基(maleimide/thiol)標(biāo)記已成為僅次于NHS/胺基標(biāo)記的最常用生物連接反應(yīng)(bioconjugation)。
Cy5-馬來酰亞胺的水溶性較低，所以在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等。如需標(biāo)記的分子對有機(jī)溶劑敏感，可選擇磺化花青素（sulfonated cyanine），即磺化Cy5-馬來酰亞胺。兩者的光譜性質(zhì)幾乎一致，因此大部分應(yīng)用可相互替換。兩者的主要區(qū)別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)不需要使用有機(jī)共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強(qiáng)標(biāo)記效率。
Cy5-馬來酰亞胺標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是640/664nm。和它具有相似熒光特性的染料包括Alexa Fluor 647，DyLight 649，ATTO 647等。

• Cy5-馬來酰亞胺水溶性較低，標(biāo)記反應(yīng)可在有機(jī)溶劑中進(jìn)行或者含有機(jī)助溶劑的水相中進(jìn)行。
• 天然生物分子中巰基一般于氧化狀態(tài)(如雙硫鍵)存在，在馬來酰亞胺標(biāo)記前，務(wù)必用還原劑(如DTT，TCEP)活化巰基并除去多余還原劑。
• 馬來酰亞胺也可以和疊氮化合物反應(yīng)，應(yīng)避免疊氮官能團(tuán)。
• 標(biāo)記反應(yīng)不要放在強(qiáng)光下，因為大部分熒光化合物在強(qiáng)光下長時間照射會緩慢光漂泊(photobleaching)。

外觀 :    深藍(lán)色固體
ex/em :    640/664 nm (PBS緩沖液)
消光系數(shù)(ε) :    250000 L?mol?1?cm?1
量子產(chǎn)率(Φ) :    0.2