堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸不萘酚，后者不偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細胞質(zhì)中。

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色，堿性磷酸酶活性部位呈藍色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

一、涂片或切片
1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定)，水洗。
2、滴加配制好的堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)，放入濕盒中，避光孵育15～20min，水洗。
3、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3～5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
二、貼壁培養(yǎng)細胞
1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細胞，棄液，PBS清洗干凈
2、加入堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。
3、滴加配制好的堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)，放入濕盒中，避光孵育15～20min，PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3～5min。
5、PBS清洗、鏡檢。

ALP活性部位藍色
細胞核紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
血液、骨髓涂片

1.血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。
2.培養(yǎng)細胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微，以免損傷或丟失細胞。
3.ALP孵育液易失效或降低陽性強度，即配即用，不宜久置。
4.復(fù)染時，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5.每次染色時，應(yīng)有陽性對照片。

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱 ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。