大鼠晶狀體上皮細胞分離自晶狀體組織;晶狀體源自胚胎發(fā)育外胚層,僅含有上皮細胞及其產(chǎn)物,晶狀體囊膜作為屏障將晶狀體與其它類型細胞完全分開;因而,晶狀體上皮細胞培養(yǎng)既無神經(jīng)和血管組織的干擾,又不受其它類型細胞如成纖維細胞的污染,保證了培養(yǎng)中細胞成分的單一性。
大鼠晶狀體上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來;細胞經(jīng)BFSP2免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

大鼠晶狀體上皮細胞
哺乳動物的晶狀體主要由兩種細胞組成:形成主體的晶狀體纖維細胞和一層覆蓋在晶狀體前表面的單層上皮細胞。晶狀體上皮細胞主要負責調節(jié)晶狀體的生理平衡,包括電解質和液體的輸送。在正常的發(fā)育過程中,晶狀體上皮細胞分化和成熟,然后遷移到晶狀體內部,產(chǎn)生晶體蛋白,自身也拉長而變成晶狀體纖維細胞,并最終失去細胞核和其它的細胞器。研究表明晶狀體上皮細胞的分化和極化受到了眼部液體中的生長因子的調控,包括表皮生長因子和胰島素等
1.取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3.細胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴1min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入完全培養(yǎng)液終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
1) 組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)
細胞鑒定:CK18免疫熒光染色為陽性
。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
1:2傳代
大鼠
晶狀體組織
大鼠晶狀體上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來。
貼壁生長
上皮細胞樣,不規(guī)則細胞樣