Tozasertib (VX-680, MK-0457)是一種pan-Aurora抑制劑，對Aurora A作用最強(qiáng)，無細(xì)胞試驗(yàn)中Kiapp為0.6 nM，而對Aurora B/Aurora C的作用較弱，對Aurora A選擇性比其他55種激酶高100倍。唯二的例外是 Fms-related tyrosine kinase-3 (FLT-3) 和 BCR-ABL tyrosine kinase，也可被 Tozasertib 抑制，對應(yīng)的Ki值均為30 nM和30 nM。Tozasertib 可誘導(dǎo)凋亡和自噬。Phase 2。

Target	Value
Aurora A (Cell-free assay)	0.6 nM(Ki app)
Aurora C (Cell-free assay)	4.6 nM(Ki app)
Aurora B (Cell-free assay)	18 nM(Ki app)
FLT3 (Cell-free assay)	30 nM(Ki)
Bcr-Abl (Cell-free assay)	30 nM(Ki)

雖然VX-680具有多激酶特性，VX-680卻誘導(dǎo)相似的細(xì)胞毒性，IC50約為300 nM，在G2/M期，核內(nèi)復(fù)制期，及轉(zhuǎn)染ABL或FLT-3激酶的BaF3細(xì)胞凋亡時，顯示一個Aurora B 類似的抑制表現(xiàn)型。VX-680抑制CAL-62細(xì)胞增殖，這種作用存在時間依賴性。用VX-680處理14天，明顯降低群體的數(shù)量和大小，處理8305C下降達(dá)到70%，處理CAL-62, 8505C,和BHT-101下降達(dá)到90%。用VX-680處理不同ATC細(xì)胞，抑制細(xì)胞增殖，IC50為25到150 ?nM，這種作用存在時間和劑量依賴性。在軟瓊脂中，VX-680明顯削弱不同細(xì)胞系形成群落的能力。caspase-3的活性分析顯示VX-680誘導(dǎo)不同細(xì)胞凋亡。VX-680處理CAL-62 細(xì)胞12小時，形成DNA含量≥4N細(xì)胞累積物。微速攝影分析顯示VX-680處理的CAL-62細(xì)胞離開細(xì)胞中期。VX-680可以抑制組蛋白H3的磷酸化作用。 VX-680作用于攜帶T315I突變的BCR-Abl的病人樣本，具有明顯抑制活性。

VX-680作用于人類AML(HL-60)移植瘤模型明顯降低腫瘤尺寸。VX-680按75 mg/kg劑量給藥實(shí)驗(yàn)鼠,每天腹腔注射兩次，持續(xù)13天,與對照組相比，平均腫瘤體積下降達(dá)98%。腫瘤體積比實(shí)驗(yàn)之前初始體積小很多。按12.5 mg/kg劑量每天給藥兩次，腫瘤生長也明顯降低，這種作用存在劑量依賴性。VX-680耐受性很好，只有在使用高劑量時可以觀察到實(shí)驗(yàn)動物體重稍微降低。通過比較cisplatin,按5.4 mg/kg劑量給藥，每四天腹腔注射一次，一共進(jìn)行三次，抑制腫瘤生長只達(dá)9%。VX-680作用于胰臟和結(jié)腸移植瘤，也引起腫瘤衰退。VX-680靜脈注射給藥攜帶HCT116腫瘤的實(shí)驗(yàn)鼠，顯示很強(qiáng)的抗癌活性。使用高劑量VX-680(每小時2 mg/kg)處理，明顯提高效果，比實(shí)驗(yàn)錢的初始腫瘤平均尺寸下降56%。VX-680的藥物是Vertex Pharmaceuticals(VRTX)的產(chǎn)品，它是第一種以奧羅拉激酶(Aurora kinases)為目標(biāo)，阻止腫瘤增長的藥物。該藥物主要用于治療血液腫瘤、結(jié)腸癌和乳腺癌。

以N-甲基哌嗪和N-[4-[[4-氯-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-氨基)嘧啶-2-基]磺酰基]苯基]氨基環(huán)丙羧酸為原料，合成N-(4-((4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)硫基)苯基)環(huán)丙烷甲酰胺的一般步驟如下：將N-甲基哌嗪（10 mL）加入化合物D（2.373 g，5.92 mmol）中，反應(yīng)混合物于110°C攪拌2小時。反應(yīng)完成后，通過減壓蒸餾除去過量的N-甲基哌嗪。將殘余物溶解于乙酸乙酯中，依次用碳酸氫鈉水溶液洗滌和硫酸鎂干燥，隨后濃縮。所得殘余物通過甲醇結(jié)晶純化，得到目標(biāo)產(chǎn)物I的無色晶體（1.82 g，產(chǎn)率66%）。產(chǎn)物經(jīng)1H-NMR（DMSO-d6）表征，化學(xué)位移δ分別為0.81（4H，d），1.79（1H，m），2.01（3H，s），2.18（3H，s），2.30（4H，m），3.35（掩蔽信號），5.42（1H，s），6.02（1H，br s），7.47（2H，d），7.69（2H，d），9.22（1H，s），10.39（1H，s），11.69（1H，s）。

參考文獻(xiàn)：

[1] Patent: WO2007/14250, 2007, A2. Location in patent: Page/Page column 19

[2] Patent: WO2008/13807, 2008, A2. Location in patent: Page/Page column 7

[3] Patent: WO2004/833, 2003, A1. Location in patent: Page 46

[4] Patent: US2009/105270, 2009, A1