磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
| 中文名稱 | 磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 |
|---|---|
| 中文同義詞 | 磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 |
| 英文名稱 | Calcium Phosphate Cell Transfection Kit |
| 英文同義詞 | |
| CAS號(hào) | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS號(hào) | |
| 相關(guān)類別 | 細(xì)胞生物學(xué)-細(xì)胞培養(yǎng) |
| Mol文件 | Mol File |
| 結(jié)構(gòu)式 |
磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 性質(zhì)
磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒在傳統(tǒng)的磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良,提高了轉(zhuǎn)染效率,并降低了毒性。用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞,不僅可以瞬時(shí)表達(dá),也可以篩選穩(wěn)定株。
HEK293或HEK293T細(xì)胞,即通常所謂的293細(xì)胞,是最適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞之一,優(yōu)化條件后轉(zhuǎn)染效率可以高達(dá)90%以上;通常很容易達(dá)到40-50%左右的轉(zhuǎn)染效率。
大多數(shù)常見的細(xì)胞例如Hela細(xì)胞、CHO細(xì)胞等也都適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染,但效率比293細(xì)胞要略低一些。磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒不僅適合于大多數(shù)貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,也適用于一些懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒提供的試劑都經(jīng)無(wú)菌處理,可以直接使用。

1傳代細(xì)胞準(zhǔn)備細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前24h傳代,待細(xì)胞密度達(dá)50%~60%滿底時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。加入沉淀前3~4h,用9ml完全培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。
2 DNA沉淀液的準(zhǔn)備首先將質(zhì)粒DNA用乙醇沉淀(10~50μg/10cm平板),空氣中晾干沉淀,將DNA沉淀重懸于μL無(wú)菌水中,加50μL2.5mol/L CaCl2。
3用巴斯德吸管在500μL 2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液,同時(shí)用另一吸管吹打溶液,直至DNA-CaCl2溶液滴完,整個(gè)過程需緩慢進(jìn)行,至少需持續(xù)1~2min。
4室溫靜置30min,出現(xiàn)細(xì)小顆粒沉淀。
5將沉淀逐滴均勻加入10cm平板中,輕輕晃動(dòng)。
6在標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞4~16h。除去培養(yǎng)液,用5ml 1×HeBS洗細(xì)胞2次,加入10ml完全培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。收集細(xì)胞或分入培養(yǎng)皿中選擇培養(yǎng)。