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磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒

磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒

中文名稱磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
中文同義詞磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
英文名稱Calcium Phosphate Cell Transfection Kit
英文同義詞
CAS號(hào)
分子式
分子量0
EINECS號(hào)
相關(guān)類別細(xì)胞生物學(xué)-細(xì)胞培養(yǎng)
Mol文件Mol File
結(jié)構(gòu)式磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 結(jié)構(gòu)式

磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 性質(zhì)

磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 用途與合成方法

磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒在傳統(tǒng)的磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良,提高了轉(zhuǎn)染效率,并降低了毒性。用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞,不僅可以瞬時(shí)表達(dá),也可以篩選穩(wěn)定株。
HEK293或HEK293T細(xì)胞,即通常所謂的293細(xì)胞,是最適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞之一,優(yōu)化條件后轉(zhuǎn)染效率可以高達(dá)90%以上;通常很容易達(dá)到40-50%左右的轉(zhuǎn)染效率。
大多數(shù)常見的細(xì)胞例如Hela細(xì)胞、CHO細(xì)胞等也都適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染,但效率比293細(xì)胞要略低一些。磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒不僅適合于大多數(shù)貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,也適用于一些懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒提供的試劑都經(jīng)無(wú)菌處理,可以直接使用。

磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒

1傳代細(xì)胞準(zhǔn)備細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前24h傳代,待細(xì)胞密度達(dá)50%~60%滿底時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。加入沉淀前3~4h,用9ml完全培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。
2 DNA沉淀液的準(zhǔn)備首先將質(zhì)粒DNA用乙醇沉淀(10~50μg/10cm平板),空氣中晾干沉淀,將DNA沉淀重懸于μL無(wú)菌水中,加50μL2.5mol/L CaCl2。
3用巴斯德吸管在500μL 2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液,同時(shí)用另一吸管吹打溶液,直至DNA-CaCl2溶液滴完,整個(gè)過程需緩慢進(jìn)行,至少需持續(xù)1~2min。
4室溫靜置30min,出現(xiàn)細(xì)小顆粒沉淀。
5將沉淀逐滴均勻加入10cm平板中,輕輕晃動(dòng)。
6在標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞4~16h。除去培養(yǎng)液,用5ml 1×HeBS洗細(xì)胞2次,加入10ml完全培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。收集細(xì)胞或分入培養(yǎng)皿中選擇培養(yǎng)。

安全信息

MSDS信息

磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 上下游產(chǎn)品信息

Tag:磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
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