BCA蛋白定量試劑盒基于二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）與銅離子的顯色反應(yīng)。在堿性條件下，蛋白質(zhì)可將二價(jià)銅離子（Cu2?）還原為一價(jià)銅離子（Cu?），BCA與Cu?螯合形成紫藍(lán)色復(fù)合物，該復(fù)合物在562nm處有強(qiáng)烈吸光性，吸光度與蛋白濃度在一定范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，從而可通過(guò)測(cè)定吸光值來(lái)確定蛋白濃度。BCA蛋白定量試劑盒一般由BCA溶液、銅溶液和牛血清白蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)品組成。

靈敏度高：檢測(cè)濃度下限可達(dá)10μg/ml-25μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量可低至0.2μg-0.5μg。

抗干擾性強(qiáng)：對(duì)去污劑等化學(xué)物質(zhì)耐受性好，如可兼容樣品中高達(dá)5%的SDS、Triton X-100、Tween-20、60、80。

線性范圍廣：在20μg/ml-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

操作簡(jiǎn)便：一般45分鐘內(nèi)即可完成測(cè)定。

BCA蛋白測(cè)定法是在堿性環(huán)境下，通過(guò)蛋白將Cu2+還原為Cu1+，再通過(guò)二辛可寧酸(BCA)來(lái)檢測(cè)亞銅陽(yáng)離子(Cu1+)。第一步是銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)螯合，形成淺藍(lán)色復(fù)合物，這一過(guò)程被稱為雙縮脲反應(yīng)。在該反應(yīng)（雙縮脲反應(yīng)）中，由三個(gè)或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合復(fù)合物。

在顯色反應(yīng)的第二步中，BCA與第一步形成的還原型（亞銅）陽(yáng)離子發(fā)生反應(yīng)。兩分子BCA與一個(gè)亞銅離子螯合，產(chǎn)生深紫色反應(yīng)產(chǎn)物。BCA/銅復(fù)合物是水溶性的，在562 nm處具有強(qiáng)線性吸收，且吸收度隨蛋白質(zhì)濃度增加而升高。該復(fù)合物的靈敏度（檢測(cè)下限）大約是第一個(gè)反應(yīng)中淡藍(lán)色的100倍。

目前世界上最常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCAProteinAssaykit)和Braatord蛋白定量試劑盒(BradfordProteinAssayKit),BCA法與傳統(tǒng)方法相比更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定、更靈敏，BCA法測(cè)定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，對(duì)于5%以內(nèi)的SDS、TritonX-100、Tween20、Tween80具有很好的兼容性，但BCA法測(cè)定蛋白濃度易受整合劑、高濃度的還原劑等的影響，在BCA法測(cè)定蛋白濃度前應(yīng)盡量使：EDTA濃度≤1mM，2-ME≤0.01%。