先以螢光素為底物來檢測螢火蟲螢光素酶，后以腸腔素為底物來檢測海腎螢光素酶，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí)，同時(shí)加入抑制螢火蟲熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測僅僅檢測到海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測。Firefly & Renilla Dual Luciferase Assay Kit（雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒）為雙報(bào)告基因檢測提供有效的手段。在 DLR檢測中，螢火蟲（Firefly）螢光素酶和海腎（Renilla）螢光素酶的活性可在單個(gè)樣品中依次檢測。首先是先以螢光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)，后以腸腔素(coelenterazine)為底物來檢測海腎螢光素酶(Renilla luciferase)，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí)，同時(shí)加入抑制螢火蟲熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測僅僅檢測到海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5'啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3'-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。 Renilla luciferase相對更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。通常把感興趣 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物螢光(bioluminescence)。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的過程中也會(huì)發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀進(jìn)行測定。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。