產(chǎn)品名稱：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷
英文名稱：IPTG
CAS：??? 367-93-1
分子式：??? C9H18O5S
貨號：??? Y0014
結(jié)構(gòu)式：
產(chǎn)品簡介
?????? 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（簡稱IPTG）是一種作用極強的誘導(dǎo)劑，由于在誘導(dǎo)過程中不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應(yīng)用。IPTG作為誘導(dǎo)劑常用于生物制藥、酶催化技術(shù)等領(lǐng)域。
IPTG具體應(yīng)用
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蜜蜂在維持自然生態(tài)平衡和生態(tài)農(nóng)業(yè)，供給人類高營養(yǎng)和保健功能蜂產(chǎn)品的過程中扮演重要角色。但近十年來，由于各種原因，世界各地的蜜蜂大量流失，嚴(yán)重威脅各國的養(yǎng)蜂業(yè)、生態(tài)平衡和農(nóng)村農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。蜜蜂幼蟲感染的病毒主要是囊狀幼蟲病毒(SBV)。SBV感染中華蜜蜂時被稱為中蜂囊狀幼蟲病毒(CSBV)，CSBV使中蜂幼蟲不完全蛹化且蛹內(nèi)充滿病毒粒子。當(dāng)損害嚴(yán)重時，大量幼蟲會因感染而死亡，同時成蟲為維護(hù)蜂群的生存環(huán)境而清理病死的幼蟲時也會被感染上CSBV，最終導(dǎo)致種群的滅絕，對養(yǎng)蜂產(chǎn)業(yè)形成無法挽回的損失。
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為了檢測感染CSBV前后中蜂幼蟲體內(nèi)神經(jīng)酰胺含量的變化，對感染CSBV病毒的中蜂幼蟲體內(nèi)神經(jīng)酰胺含量進(jìn)行檢測。目前市面上，主要為檢測昆蟲神經(jīng)酰胺的試劑盒，沒有針對中蜂感染CSBV后神經(jīng)酰胺含量檢測的試劑盒。因此，CN117924437A專利開發(fā)了一種中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒及檢測方法，檢測試抗體具體制備方法如下：
(1)以中華蜜蜂中性鞘磷脂酶(AcnSMase)作為關(guān)鍵酶；
(2)以中華蜜蜂幼蟲的cDNA為模板進(jìn)行AcnSMase基因擴增，獲得840bp左右的核酸片段，切膠回收目的片段，連接PMD19-T克隆載體并完成轉(zhuǎn)化，挑取單菌落進(jìn)行菌液PCR，質(zhì)粒PCR和雙酶切三重驗證，成功構(gòu)建PMD19-T-AcnSMase，進(jìn)行下一步表達(dá)載體的構(gòu)建。
(3)將重組質(zhì)粒與空載GST載體質(zhì)粒雙酶切并回收目的片段，完成連接轉(zhuǎn)化后，挑選單菌落進(jìn)行菌液PCR，質(zhì)粒PCR和雙酶切驗證成功，表明成功構(gòu)建重組表達(dá)載體，隨后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入Rossetta感受態(tài)細(xì)胞，挑取單菌落進(jìn)行菌液PCR篩選到陽性菌株進(jìn)行后續(xù)重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)。
(4)將表達(dá)菌株在37℃下培養(yǎng)7h，在OD值在0.6-0.8時加入終濃度為0.1mM的IPTG誘導(dǎo)8h，進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析，在58KD左右處有明顯差異條帶，表明重組蛋白誘導(dǎo)成功，對重組蛋白表達(dá)形式的檢測發(fā)現(xiàn)，該重組蛋白主要在沉淀中以包涵體的形式存在；隨后大批誘導(dǎo)該重組蛋白，用鎳柱親和層析純化給蛋白，用于后續(xù)免疫小鼠，獲得多克隆抗體。
本專利中的檢測試劑盒用于檢測中蜂病原微生物感染情況，輔助有關(guān)蜜蜂生產(chǎn)以及相關(guān)實驗研究，與現(xiàn)有昆蟲神經(jīng)酰胺檢測試劑盒相比，該試劑盒的成本更低。
參考文獻(xiàn)
CN117929706A 一種中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒及檢測方法.