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主營產(chǎn)品：細胞系/原代細胞/培養(yǎng)基/基因編輯/功能檢測；重組蛋白/抗體；標記試劑盒；WB/IHC/TSA/ELISA試劑盒
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在病理學和腫瘤免疫研究中，組織切片承載的信息量巨大，但傳統(tǒng)免疫組化(IHC)方法每次通常只能檢測1–2個標志物，這不僅浪費樣本，也限制了對復雜微環(huán)境的理解。近年來，多重免疫熒光（mIHC，multiplex immunohistochemistry/fluorescence）技術(shù)以其“一張切片、多標志物同時檢測”的強大能力，正在徹底改變組織分析的格局。那么，究竟mIHC有多強？今天，我們就從技術(shù)原理、實驗流程、應用案例和優(yōu)勢解析，帶你全面了解這項革命性技術(shù)。
mIHC是基于熒光標記和TSA（tyramide signal amplification）酪酰胺信號放大的多重免疫檢測技術(shù)。通過該技術(shù)，研究者可以在同一片組織切片上檢測多個蛋白標志物，并保留空間信息，實現(xiàn)“空間組學”分析。
傳統(tǒng)IHC受限于染色通道數(shù)量和抗體種屬交叉問題，而mIHC通過以下核心原理突破這一限制：
TSA信號放大
酶促反應生成帶有熒光的沉積物，標記在靶蛋白位置。
信號強度比傳統(tǒng)熒光高10–100倍。
即使是低表達蛋白，也能清晰可見。
循環(huán)染色與抗體剝離
每輪檢測一個抗原，隨后去除一抗/二抗而不影響組織結(jié)構(gòu)。
下一輪染色可使用不同熒光通道，最終多輪累加，實現(xiàn)多標志物共定位。
多通道熒光成像
通過多光譜成像技術(shù)，可解卷疊加的熒光信號，分辨不同標志物的空間分布。
簡而言之，mIHC可以讓你“一張切片看盡全景”，同時保持組織空間信息，這是傳統(tǒng)IHC無法比擬的。
組織預處理二甲苯Ⅰ → 二甲苯Ⅱ → 100%乙醇 → 95%乙醇 → 85%乙醇 → 75%乙醇 → 蒸餾水洗滌
抗原修復高溫抗原修復 → 冷卻 → 內(nèi)源性酶阻斷
循環(huán)染色（每輪1個標志物）封閉 → 一抗孵育 → 二抗孵育 →TSA熒光底物反應 → 洗滌 → 抗體剝離
重復上述循環(huán)6輪每輪選擇不同熒光通道，累積標志物熒光信息
核染色與封片DAPI染核 → 封片 → 多通道顯微鏡成像
注意：每輪循環(huán)染色后都需要嚴格的抗體剝離，否則容易產(chǎn)生交叉信號。
假設在一張腫瘤切片上檢測6個免疫相關(guān)標志物：CD8, TIM-3, PD-1, CD68, LAG3, CK，我們可以得到以下優(yōu)勢：
通過多通道疊加成像，我們可以看到：
T細胞浸潤分布（CD8）
免疫檢查點表達（PD-1/ TIM-3/ LAG-3）
巨噬細胞與腫瘤細胞比例（CD68/CK）
加上免疫細胞增殖狀態(tài)（Ki-67），一張切片就能同時獲得免疫微環(huán)境全景，節(jié)約寶貴樣本，同時提高數(shù)據(jù)的可比性。
腫瘤免疫微環(huán)境分析
在腫瘤免疫治療研究中，mIHC可同時檢測T細胞亞群、免疫檢查點和腫瘤細胞標志物，幫助篩選應答患者。
罕見細胞群鑒定
在炎癥或再生研究中，罕見的調(diào)節(jié)性細胞或干細胞亞群難以通過單標記IHC檢測。mIHC通過多標志物組合識別，顯著提高了檢測準確性。
藥物研發(fā)與療效評估
藥物作用靶點的多重檢測可以在一張切片上完成，為藥效學研究提供直觀、定量的空間數(shù)據(jù)。
雖然mIHC優(yōu)勢明顯，但仍有挑戰(zhàn)：
抗體交叉干擾 → 使用嚴格的剝離步驟和物種/同源性優(yōu)化抗體組合。
熒光光漂白 → 選擇穩(wěn)定熒光染料或快速成像，并避免反復暴露光照。
成像與分析復雜 → 借助多光譜顯微鏡和AI圖像分析軟件，提高分辨率和數(shù)據(jù)可重現(xiàn)性。
實驗成本 → 雖然試劑成本高于傳統(tǒng)IHC，但節(jié)省了切片和實驗重復成本，總體性價比提升明顯。
一張切片檢測8個標志物，并非科幻，而是mIHC技術(shù)的真實能力。
對于腫瘤免疫微環(huán)境、藥物研發(fā)、罕見細胞群研究等場景，mIHC已成為不可或缺的“科研利器”。
如果你還在為樣本有限、實驗重復多、信息量不足而苦惱，mIHC或許就是你突破困境的關(guān)鍵。
多種標志物檢測，輕松覆蓋復雜組織微環(huán)境
高靈敏TSA信號放大，低背景、高穩(wěn)定
完整實驗方案與技術(shù)支持，省時省力
兼容多種組織類型，無抗體種屬限制
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商家暫時不對外公布