關(guān)鍵詞:C9、補(bǔ)體成分9、重組蛋白、膜攻擊復(fù)合體、補(bǔ)體終末途徑、感染免疫、N-His、大腸桿菌表達(dá)
一、C9:分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能
C9(ComplementComponent9)是由 C9 基因編碼的血清糖蛋白,是補(bǔ)體系統(tǒng)終末成分,也是膜攻擊復(fù)合體(MembraneAttackComplex,MAC)的成孔亞基。C9以單體形式(mC9)存在于血清中,分子量約63kDa。在補(bǔ)體激活過(guò)程中,C9與C5b-8中間復(fù)合物結(jié)合,形成C5b-9復(fù)合物,催化C9聚合生成C5b-p9(即膜攻擊復(fù)合體MAC),在靶細(xì)胞膜上形成跨膜通道,導(dǎo)致靶細(xì)胞裂解。本產(chǎn)品為重組人C9蛋白(Gln22-His265),采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),N端攜帶His標(biāo)簽,經(jīng)純化后獲得高純度蛋白。
C9的核心生理功能包括:
膜攻擊復(fù)合體(MAC)組裝:C9是MAC組裝的最終步驟。在補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)中,C5b-8復(fù)合物形成后,C9與之結(jié)合并發(fā)生構(gòu)象變化,隨后多個(gè)C9分子聚合形成環(huán)狀孔道結(jié)構(gòu);
細(xì)胞裂解與病原體清除:C9聚合形成的MAC在靶細(xì)胞膜上形成跨膜孔道,導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂和細(xì)胞溶解,是機(jī)體清除病原微生物(尤其是革蘭氏陰性菌)的關(guān)鍵機(jī)制;
先天性與適應(yīng)性免疫:C9作為補(bǔ)體系統(tǒng)的終末效應(yīng)分子,在先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用,通過(guò)形成膜孔道溶解靶細(xì)胞和病原體;
C9缺陷與感染易感性:C9基因突變導(dǎo)致補(bǔ)體成分C9缺乏癥,是一種罕見(jiàn)的常染色體遺傳病。C9缺陷患者易發(fā)生復(fù)發(fā)性細(xì)菌感染,尤其是腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染;
與Perforin的結(jié)構(gòu)相似性:C9與細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的成孔蛋白Perforin在結(jié)構(gòu)、免疫學(xué)和功能上具有相似性,兩者均能聚合形成管狀病變結(jié)構(gòu)。
表達(dá)與分布:C9主要由肝細(xì)胞合成,以單體形式存在于血清中。重組C9蛋白可作為免疫原、WB/ELISA標(biāo)準(zhǔn)品用于基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化研究。
二、C9重組蛋白的科研核心價(jià)值
高質(zhì)量重組C9蛋白在多領(lǐng)域研究中具有不可替代的應(yīng)用價(jià)值:
補(bǔ)體系統(tǒng)與免疫學(xué)研究:用于研究膜攻擊復(fù)合體的組裝機(jī)制、C9聚合的分子調(diào)控、補(bǔ)體終末途徑的激活與調(diào)控;
感染免疫與病原體清除研究:分析C9在革蘭氏陰性菌殺傷中的作用機(jī)制,研究補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)菌清除效率;
C9缺陷與遺傳病研究:用于C9缺乏癥的機(jī)制研究,探索C9基因突變對(duì)蛋白功能的影響及感染易感性的分子基礎(chǔ);
成孔蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究:C9作為成孔蛋白的代表,可用于研究成孔蛋白的構(gòu)象變化、聚合機(jī)制及膜插入過(guò)程;
免疫檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品:可作為WesternBlot、ELISA的陽(yáng)性對(duì)照或定量標(biāo)準(zhǔn)品,建立檢測(cè)方法;
抗體篩選與免疫原:用于制備抗人C9單克隆/多克隆抗體,或作為免疫原進(jìn)行動(dòng)物免疫。
三、蛋白純度與質(zhì)檢驗(yàn)證(SDS-PAGE)
本產(chǎn)品經(jīng)SDS-PAGE驗(yàn)證,純度>90%,滿(mǎn)足大多數(shù)免疫檢測(cè)及細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求。代表性SDS-PAGE結(jié)果顯示:在約30.14kDa位置出現(xiàn)單一主條帶,與預(yù)測(cè)分子量一致,無(wú)明顯降解或聚集條帶。
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圖注:LaneM:分子量標(biāo)記;Lane1:還原條件下RecombinantHumanC9Protein,N-His,可見(jiàn)清晰單一條帶,純度>90%。
四、高品質(zhì)RecombinantHumanC9Protein,N-His核心參數(shù)與技術(shù)優(yōu)勢(shì)
核心產(chǎn)品參數(shù)
請(qǐng)咨詢(xún)實(shí)驗(yàn)室獲取信息
ELISA、免疫原(Immunogen)、SDS-PAGE、WB、生物活性測(cè)試(進(jìn)行中)
凍干前溶液:PBS(pH7.4),0.02%NLS,1mMEDTA,4%海藻糖,1%甘露醇
一般為凍干粉或冷凍液體,干冰/藍(lán)冰運(yùn)輸
頻繁使用:2-8℃;長(zhǎng)期保存:-20至-80℃,自收貨之日起12個(gè)月。避免反復(fù)凍融,使用手動(dòng)除霜冰箱
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng):高產(chǎn)量、成本低、批間穩(wěn)定性高,適合大規(guī)模制備;
N-His標(biāo)簽設(shè)計(jì):His標(biāo)簽便于通過(guò)親和層析進(jìn)行高純度純化,同時(shí)兼容Ni-NTA親和檢測(cè)體系,便于蛋白的檢測(cè)與追蹤;
高純度(>90%):經(jīng)SDS-PAGE驗(yàn)證,非特異性背景低,滿(mǎn)足ELISA、WB及免疫原制備等應(yīng)用要求;
多應(yīng)用場(chǎng)景:已驗(yàn)證可用于ELISA、免疫原、SDS-PAGE、WB,生物活性測(cè)試進(jìn)行中;
優(yōu)化凍干配方:含海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑,提高蛋白長(zhǎng)期穩(wěn)定性;PBS體系兼容多數(shù)下游實(shí)驗(yàn)。
FAQ(高頻問(wèn)題)
1.該重組蛋白的活性如何?是否適用于細(xì)胞培養(yǎng)?
目前生物活性測(cè)試正在進(jìn)行中。如需最新活性數(shù)據(jù),可聯(lián)系技術(shù)支持獲取。
2.如何復(fù)溶和保存?
打開(kāi)管蓋前短暫離心,加入無(wú)菌水復(fù)溶配制儲(chǔ)備液。復(fù)溶后可分裝凍存于-20℃或-80℃,避免反復(fù)凍融。
3.N端的His標(biāo)簽會(huì)影響C9的功能嗎?
His標(biāo)簽位于蛋白N端。若實(shí)驗(yàn)對(duì)標(biāo)簽敏感,可咨詢(xún)技術(shù)支持。
4.可以用于WesternBlot的陽(yáng)性對(duì)照嗎?
可以。本品已驗(yàn)證適用于WB,使用抗C9抗體或抗His標(biāo)簽抗體均可檢測(cè)。
5.該蛋白是否適合制備抗體?
可以。本品純度>90%,可作為免疫原免疫動(dòng)物(兔、小鼠等)制備多克隆或單克隆抗體。
6.本產(chǎn)品與天然C9的序列差異?
本產(chǎn)品為重組人C9片段(Gln22-His265),N端添加了His標(biāo)簽用于純化和檢測(cè)。
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