關(guān)鍵詞:APOH、載脂蛋白H、β2-糖蛋白I、重組蛋白、凝血調(diào)控、抗磷脂綜合征、自身免疫、N-His、大腸桿菌表達(dá)
一、APOH:分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能
APOH(ApolipoproteinH),又稱(chēng)β2-糖蛋白I(Beta-2-glycoproteinI),是由 APOH 基因編碼的單鏈血漿糖蛋白,分子量約50kDa。APOH是血漿脂蛋白的組成部分,具有與補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白(RCA)超家族相似的結(jié)構(gòu)特征。APOH能夠結(jié)合并中和帶負(fù)電荷的磷脂大分子,從而抑制內(nèi)源性凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的不適當(dāng)激活。本產(chǎn)品為重組人APOH蛋白(Thr22-Cys345),采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),N端攜帶His標(biāo)簽,經(jīng)純化后獲得高純度蛋白。
APOH的核心生理功能包括:
凝血調(diào)控:APOH通過(guò)結(jié)合帶負(fù)電荷的磷脂,抑制內(nèi)源性凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的不適當(dāng)激活。APOH基因參與多種生理通路,包括脂蛋白代謝、凝血和止血過(guò)程;
抗磷脂抗體靶點(diǎn):APOH是抗磷脂抗體(antiphospholipidantibodies)結(jié)合的主要靶抗原,這些抗體與血栓事件相關(guān)。APOH是狼瘡和原發(fā)性抗磷脂綜合征(APS)患者血清中抗磷脂自身抗體結(jié)合陰離子磷脂所必需的輔因子;
抗磷脂綜合征(APS)關(guān)聯(lián):APS患者的抗β2-GPI抗體可介導(dǎo)對(duì)具有抗凝血活性的活化蛋白C的抑制。β2-GPI被視為APS患者血清自身抗體結(jié)合的輔因子,與血栓形成、狼瘡性紅斑和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)密切相關(guān);
心磷脂結(jié)合:APOH能夠結(jié)合心磷脂,結(jié)合后兩者結(jié)構(gòu)均發(fā)生較大變化。APOH第五結(jié)構(gòu)域中313-316位的疏水序列(Leu-Ala-Phe-Trp)對(duì)心磷脂結(jié)合至關(guān)重要;
免疫應(yīng)答與自身免疫:APOH結(jié)合帶負(fù)電荷的磷脂,觸發(fā)自身免疫性疾病患者體內(nèi)抗磷脂自身抗體的產(chǎn)生。APOH表現(xiàn)出遺傳決定的結(jié)構(gòu)多態(tài)性,存在三種常見(jiàn)的等位基因(APOH*1、APOH*2和APOH*3);
脂蛋白代謝:APOH與血漿中的脂蛋白相關(guān)聯(lián),參與脂蛋白代謝通路。
表達(dá)與分布:APOH主要由肝臟合成,以單鏈形式存在于血漿中。重組APOH蛋白可作為免疫原、WB/ELISA標(biāo)準(zhǔn)品用于基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化研究。
二、APOH重組蛋白的科研核心價(jià)值
高質(zhì)量重組APOH蛋白在多領(lǐng)域研究中具有不可替代的應(yīng)用價(jià)值:
凝血與止血研究:用于研究APOH對(duì)磷脂依賴(lài)性凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的調(diào)控機(jī)制,探索其在血栓形成與止血中的作用;
抗磷脂綜合征(APS)與自身免疫研究:分析APOH作為抗磷脂抗體靶抗原的作用機(jī)制,研究APS的發(fā)病機(jī)制及診斷標(biāo)志物;
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)研究:用于研究狼瘡患者血清中抗磷脂自身抗體的產(chǎn)生機(jī)制及其與APOH的相互作用;
脂蛋白代謝研究:研究APOH在脂蛋白代謝中的功能及其與心血管疾病的關(guān)聯(lián);
免疫檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品:可作為WesternBlot、ELISA的陽(yáng)性對(duì)照或定量標(biāo)準(zhǔn)品,建立檢測(cè)方法;
抗體篩選與免疫原:用于制備抗人APOH單克隆/多克隆抗體,或作為免疫原進(jìn)行動(dòng)物免疫;
藥物開(kāi)發(fā)與活性測(cè)試:在細(xì)胞水平測(cè)試候選化合物對(duì)APOH與磷脂結(jié)合功能的調(diào)控作用。
三、蛋白純度與質(zhì)檢驗(yàn)證(SDS-PAGE)
本產(chǎn)品經(jīng)SDS-PAGE驗(yàn)證,純度>90%,滿(mǎn)足大多數(shù)免疫檢測(cè)及細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求。代表性SDS-PAGE結(jié)果顯示:在約38.35kDa位置出現(xiàn)單一主條帶,與預(yù)測(cè)分子量一致,無(wú)明顯降解或聚集條帶。
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圖注:LaneM:分子量標(biāo)記;Lane1:還原條件下RecombinantHumanAPOHProtein,N-His,可見(jiàn)清晰單一條帶,純度>90%。
四、高品質(zhì)RecombinantHumanAPOHProtein,N-His核心參數(shù)與技術(shù)優(yōu)勢(shì)
核心產(chǎn)品參數(shù)
請(qǐng)咨詢(xún)實(shí)驗(yàn)室獲取信息
ELISA、免疫原(Immunogen)、SDS-PAGE、WB、生物活性測(cè)試(進(jìn)行中)
凍干前溶液:PBS(pH7.4),0.02%NLS,1mMEDTA,4%海藻糖,1%甘露醇
無(wú)菌水復(fù)溶配制儲(chǔ)備液。產(chǎn)品隨附數(shù)據(jù)表副本,請(qǐng)參照其中詳細(xì)信息
一般為凍干粉或冷凍液體,干冰/藍(lán)冰運(yùn)輸
頻繁使用:2-8℃;長(zhǎng)期保存:-20至-80℃,自收貨之日起12個(gè)月。避免反復(fù)凍融,使用手動(dòng)除霜冰箱
Beta-2-glycoprotein1,APCinhibitor,Apo-H,ActivatedproteinC-bindingprotein,Beta(2)GPI,Anticardiolipincofactor,Beta-2-glycoproteinI,APOH,ApolipoproteinH,B2G1,B2GPI
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng):高產(chǎn)量、成本低、批間穩(wěn)定性高,適合大規(guī)模制備;
N-His標(biāo)簽設(shè)計(jì):His標(biāo)簽便于通過(guò)親和層析進(jìn)行高純度純化,同時(shí)兼容Ni-NTA親和檢測(cè)體系,便于蛋白的檢測(cè)與追蹤;
高純度(>90%):經(jīng)SDS-PAGE驗(yàn)證,非特異性背景低,滿(mǎn)足ELISA、WB及免疫原制備等應(yīng)用要求;
多應(yīng)用場(chǎng)景:已驗(yàn)證可用于ELISA、免疫原、SDS-PAGE、WB,生物活性測(cè)試進(jìn)行中;
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優(yōu)化凍干配方:含海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑,提高蛋白長(zhǎng)期穩(wěn)定性;PBS體系兼容多數(shù)下游實(shí)驗(yàn)。
FAQ(高頻問(wèn)題)
1.該重組蛋白的活性如何?是否適用于細(xì)胞培養(yǎng)?
目前生物活性測(cè)試正在進(jìn)行中。如需最新活性數(shù)據(jù),可聯(lián)系技術(shù)支持獲取。
2.如何復(fù)溶和保存?
打開(kāi)管蓋前短暫離心,加入無(wú)菌水復(fù)溶配制儲(chǔ)備液。產(chǎn)品隨附數(shù)據(jù)表副本,請(qǐng)參照其中詳細(xì)信息。復(fù)溶后可分裝凍存于-20℃或-80℃,避免反復(fù)凍融。
3.N端的His標(biāo)簽會(huì)影響APOH的功能嗎?
His標(biāo)簽位于蛋白N端。若實(shí)驗(yàn)對(duì)標(biāo)簽敏感,可咨詢(xún)技術(shù)支持。
4.可以用于WesternBlot的陽(yáng)性對(duì)照嗎?
可以。本品已驗(yàn)證適用于WB,使用抗APOH抗體或抗His標(biāo)簽抗體均可檢測(cè)。
5.該蛋白是否適合制備抗體?
可以。本品純度>90%,可作為免疫原免疫動(dòng)物(兔、小鼠等)制備多克隆或單克隆抗體。
6.本產(chǎn)品與天然APOH的序列差異?
本產(chǎn)品為重組人APOH片段(Thr22-Cys345),N端添加了His標(biāo)簽用于純化和檢測(cè)。
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