?

一、什么是多重免疫熒光（mIHC）試劑盒？

由于mIHC實(shí)驗(yàn)流程復(fù)雜，涉及抗原修復(fù)、信號(hào)放大、熒光通道匹配、抗體剝離及背景控制等多個(gè)關(guān)鍵步驟，因此專業(yè)mIHC試劑盒通過(guò)整合優(yōu)化的熒光染料體系、HRP檢測(cè)試劑及配套緩沖體系，可有效提升實(shí)驗(yàn)重復(fù)性、降低熒光串?dāng)_和非特異背景，為高質(zhì)量、多指標(biāo)組織成像研究提供標(biāo)準(zhǔn)化支持。

TSA（Tyramide Signal Amplification，酪胺信號(hào)放大）試劑盒是一類基于HRP酶催化熒光酪胺分子沉積原理開(kāi)發(fā)的高靈敏度免疫檢測(cè)體系，其核心機(jī)制是利用HRP標(biāo)記二抗催化活化熒光酪胺，使其在目標(biāo)抗原周圍發(fā)生共價(jià)沉積，從而實(shí)現(xiàn)局部高密度熒光富集，顯著提高檢測(cè)靈敏度，尤其適用于低表達(dá)抗原、FFPE組織樣本以及弱信號(hào)蛋白檢測(cè)。相比傳統(tǒng)免疫熒光技術(shù)，TSA試劑盒不僅能夠?qū)崿F(xiàn)數(shù)十倍甚至更高的信號(hào)放大，還可在多輪染色過(guò)程中保留穩(wěn)定熒光信號(hào)，因此支持同一組織切片上進(jìn)行2-6重甚至更高通量的多指標(biāo)檢測(cè)，并有效降低同種屬抗體交叉反應(yīng)帶來(lái)的限制。專業(yè)TSA試劑盒通常包含不同波長(zhǎng)的熒光酪胺染料、HRP二抗、封閉液、抗原修復(fù)液、抗體剝離液及抗熒光淬滅封片劑等關(guān)鍵組分，可幫助研究人員降低背景噪聲、減少熒光串色、提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和組織信號(hào)穩(wěn)定性，同時(shí)兼容自動(dòng)化染色平臺(tái)、光譜成像系統(tǒng)及數(shù)字病理分析軟件，因此已成為腫瘤免疫微環(huán)境研究、PD-1/PD-L1免疫治療評(píng)估、空間組學(xué)分析及精準(zhǔn)病理研究中的核心工具。

?

二、多重免疫熒光mIHC試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1、高靈敏度檢測(cè)

mIHC試劑盒基于TSA酶促信號(hào)放大技術(shù)，可顯著增強(qiáng)目標(biāo)蛋白熒光信號(hào)，即使是低豐度、弱表達(dá)或難檢測(cè)抗原，也能夠獲得清晰穩(wěn)定的成像結(jié)果，特別適用于FFPE組織樣本及臨床病理研究。

2、高通量多重檢測(cè)能力

相比傳統(tǒng)IHC或普通免疫熒光一次僅能檢測(cè)1–2個(gè)指標(biāo)，mIHC試劑盒可在同一張組織切片上實(shí)現(xiàn)2–7色甚至更高通量的Marker聯(lián)合檢測(cè)，同時(shí)分析多種免疫細(xì)胞、腫瘤標(biāo)志物及功能蛋白，大幅提升組織信息獲取效率。

3、兼容FFPE臨床樣本

專業(yè)mIHC試劑盒針對(duì)福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織進(jìn)行了優(yōu)化，能夠有效改善抗原修復(fù)效果和弱信號(hào)檢測(cè)能力，因此廣泛適用于石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片、細(xì)胞涂片、類器官等多種組織樣本。

4、完整保留空間信息

mIHC技術(shù)不僅能夠檢測(cè)蛋白表達(dá)水平，更能夠在組織原位保留細(xì)胞空間分布關(guān)系，實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間的空間定位分析，為空間病理學(xué)與空間生物學(xué)研究提供重要支持。

5、信號(hào)穩(wěn)定、背景低

優(yōu)化的TSA體系與緩沖體系可有效降低非特異背景、熒光串色及抗體交叉反應(yīng)問(wèn)題，提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和數(shù)據(jù)一致性，同時(shí)具有優(yōu)異的抗淬滅性能，適用于長(zhǎng)時(shí)間掃描與數(shù)字病理分析。

6、支持自動(dòng)化與數(shù)字病理分析

現(xiàn)代mIHC試劑盒通常兼容自動(dòng)化染色平臺(tái)、多光譜掃描系統(tǒng)及AI數(shù)字病理分析軟件，可實(shí)現(xiàn)高通量、標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)流程，并支持單細(xì)胞分型、空間鄰域分析及定量病理研究。

?

三、EnkiLife多重免疫熒光 mIHC 試劑盒產(chǎn)品?

TSA全套試劑盒配套組分

?

四、試劑盒操作流程（以石蠟切片為例）

1. 脫蠟：將切片依次浸泡于二甲苯1（15min）、二甲苯2（15min）、無(wú)水乙醇1（5min）、無(wú)水乙醇2（5min）、 95%乙醇（5min）、 85%乙醇（5min）、 75%乙醇（5min），最后用水漂洗片子。

2. 抗原修復(fù)：抗原修復(fù)通常使用1×檸檬酸（PH6.0）作為修復(fù)液，高溫高壓修復(fù)，將切片

置于高壓鍋中，加入適量的修復(fù)液，關(guān)上高壓鍋，待上汽后計(jì)時(shí) 2min，冷卻至室溫，修復(fù)完畢。【如遇表達(dá)較弱的指標(biāo)，則可用EDTA（PH9.0）作為修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)。如遇骨組織、腦組織等易掉片組織，則采用微波修復(fù)，修復(fù)溫度控制在 80℃左右，修復(fù)液可用2×檸檬酸（PH6.0）?！?/p>

3. 內(nèi)源性酶阻斷：用純水配制3%H2O2溶液，將切片放于溶液中，室溫孵育20min。如遇易掉片組織，可適當(dāng)降低H2O2濃度和孵育時(shí)間。

4. 封閉：在組織上滴加封閉液，37℃孵育30min。

5. 一抗孵育：使用抗體稀釋液按照適宜濃度稀釋一抗，在組織上滴加抗體，4℃過(guò)夜孵育，或者37℃孵育1h。

6. 二抗孵育：在組織上滴加HRP酶標(biāo)記的二抗，37℃孵育1h。

7. 孵育TSA試劑：在組織上滴加TSA-XXX熒光染料，37℃孵育30min，再用PBST洗滌3次，每次5min。

8. 抗體洗脫：在組織上滴加抗體洗脫液，室溫孵育15min（37℃孵育更佳）。

9. 重復(fù)4-8步驟（孵育其他TSA-XXX熒光染料）

10. DAPI染核：將DAPI工作液滴加到組織上，室溫孵育5min，再用PBS洗滌3次，每次5min。將液體甩干，在組織上滴加抗熒光淬滅封片劑，蓋上蓋玻片，鏡檢拍照。

?

Enkilife專注于多重免疫熒光與空間生物學(xué)研究領(lǐng)域，可為科研用戶提供完整的TSA-mIHC試劑體系、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案及專業(yè)技術(shù)支持服務(wù)，幫助研究人員快速建立穩(wěn)定可靠的多重?zé)晒鈾z測(cè)平臺(tái)，推動(dòng)高質(zhì)量科研成果與臨床轉(zhuǎn)化研究的實(shí)現(xiàn)。