檢測前準(zhǔn)備工作：
1.?請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2.?從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃
3.?20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)原理：
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被植物氨基脫氧分支酸合成酶（ADCS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物氨基脫氧分支酸合成酶（ADCS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性。
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實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：
1.?酶標(biāo)儀（450nm）
2.?高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.?37℃恒溫箱
4.?蒸餾水或去離子水
樣本處理及要求：
植物組織樣本ELISA檢測處理方法
一、組織勻漿的制備：
1、取組織塊（0.1g-0.5g）最少可到5-10mg在冰冷的PBS中漂洗，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱重，放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(mg):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
3、勻漿的方式：手工勻漿，機(jī)器勻漿。
① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6-8分鐘），充分研碎，制成10%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī)10000-15000 轉(zhuǎn)/分上下研磨制成10%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3-5次，在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長勻漿時(shí)間），鏡檢觀察。
4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000轉(zhuǎn)/分左右,離心10-15分鐘，取上清液進(jìn)行測定。
二、勻漿介質(zhì)：
?一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。
三、樣本保存： ??????
1.?植物組織樣本暫時(shí)不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復(fù)凍融，-20℃以下可保 存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。