一、目的
? ? ? ? ? ? ? ??
規(guī)范組織芯片（Tissue Microarray, TMA）送樣指南，保證陣列位點完整、組織形態(tài)完好、抗原保存穩(wěn)定，適用于后續(xù) IHC、IF、PLA、原位雜交和 Nanostring DSP等實驗。
? ? ? ? ? ? ? ? ??
二、適用范圍
? ? ? ? ? ? ? ? ?
臨床手術標本、動物組織福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本的組織芯片制備。
? ? ? ? ? ? ??
三、組織固定要求
? ? ? ? ? ? ? ? ?
1) 組織離體時間不宜超過 30min，應盡快固定；
修剪組織為標準大小：1cm×1cm×0.2～0.3cm，最大極限組織尺寸不超過：1.5cm×1.5cm×0.3cm，厚度不超過3mm，不小于1mm，過厚的組織塊會導致固定和脫水不充分，影響后續(xù)切片質量，過薄的組織易造成脫水浸蠟過度、組織發(fā)脆，打孔取芯時易碎裂打穿，修塊及切片中易缺失靶組織、位點空洞。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
2) 腫瘤樣本：必須包含癌區(qū)、癌旁正常組織、交界區(qū)，避開大片壞死、出血、鈣化區(qū)域,剔除縫線異物、嚴重脂肪空泡、擠壓撕裂區(qū)域。盡量平整切面，不要褶皺、卷曲、擠壓撕裂。
? ? ? ? ? ? ? ??
3) 組織固定液：推薦 10%NBF 或 4%PFA，10%NBF 穿透力強，4%PFA 穿透力弱一些；固定液體積是組織塊體積的10-20倍，以達到組織充分固定的效果
? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
4) 固定時間：根據組織塊大小而不同，0.5cm直徑組織塊一般 18-24h。固定時間不宜太長，＞48h 過度固定（抗原遮蔽、RNA 降解）
? ? ? ? ??
四、FFPE 蠟塊要求（如果送的樣本為蠟塊樣本）?
? ? ? ? ? ? ? ?
1) 組織固定需符合 1 中的要求；
? ? ? ? ??
2) 存放條件：將蠟塊放入干燥器中，保持干燥環(huán)境，室溫保存；
? ? ? ? ? ? ??
3) 蠟塊年齡：小于 3 年的蠟塊 Nanostring 做過實驗驗證沒有問題，3-10 年的蠟塊Nanostring 項目做過類似服務可以得到比較理想結果，超過 10 年的蠟塊需要客戶自行驗證蛋白與RNA 的完整性。
? ? ? ? ? ?
4) 蠟塊質量：石蠟致密無空洞、無裂紋、無發(fā)白粉化。組織與蠟結合緊密，無脫裂、無空鼓。蠟塊表面平整，無凹陷、無溢蠟過厚。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
五、HE復診
? ? ? ? ? ? ?
做 TMA 前必須先切 HE 片染色：定位靶點、確認組織結構完好，再上機打孔。
? ? ? ? ? ? ??
1) 每例供體蠟塊常規(guī)切片、裱片、HE 染色。
? ? ? ? ?
2) 病理鏡下或掃描成像確認：癌區(qū)、癌旁、正常組織、病變靶點位置。
? ? ? ? ? ? ? ?
3) 用記號筆在蠟塊表面精準圈定目標取材區(qū)域，避開壞死、鈣化、出血區(qū)。
? ? ? ? ? ? ? ??
六、組織芯片排布 & 打孔常用規(guī)格
? ? ? ? ? ? ? ? ??
1) 常用孔徑：1.0 mm / 1.5 mm / 2.0 mm；芯間距 0.3～0.5 mm。
? ? ? ? ? ? ??
2.0 mm直徑，5行*13列--65芯（大病灶、需更多細胞量）
1.5mm直徑，8行*18列--144芯（最通用、常規(guī)臨床樣本首選）
1.0mm直徑，10行*22列--220芯（微小病灶、穿刺標本、小動物組織、樣本數量多陣列）
? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
2) 每例建議至少2～3 個復孔，減少位點缺失，滿足統(tǒng)計學要求。
? ? ? ? ? ? ??
七、Nanostring DSP 專屬規(guī)格（貼片區(qū)域是35.3mm*14.1mm）
? ? ? ? ? ? ? ? ??
1) 2.0 mm直徑，5行*13列--65芯
? ? ? ? ? ? ?
2) 1.5mm直徑，6行*17列--102芯
? ? ? ? ? ? ??
3) 1.0mm直徑，8行*20列--160芯
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
八、送樣要求
? ? ? ? ? ? ?
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
九、注意事項
? ? ? ? ? ? ? ?
1) 新鮮組織固定超時 / 固定液不對 → 抗原報廢；
? ? ? ? ? ?
2) 蠟塊粉化、開裂、組織空鼓 → 打孔掉芯、脫片；
? ? ? ? ? ? ? ?
3) 不先 HE 復診直接打孔 → 打不到病灶、位點無效；
? ? ? ? ? ? ? ?
4) 組織過厚 / 過薄 → 脫水不佳、陣列高低不平；
? ? ? ? ? ? ??
5) 老舊多年蠟塊強行做 TMA → 染色普遍無信號、背景極高；
? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
?
樂備實（上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司旗下全資子公司），是國內專注于提供高質量蛋白檢測以及組學分析服務的實驗服務專家，自2018年成立以來，樂備實不斷尋求突破，公司的服務技術平臺已擴展到單細胞測序、空間多組學、流式檢測、超敏電化學發(fā)光、Luminex多因子檢測、抗體芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫組化、DSP空間多組學等30多個，建立起了一套涵蓋基因、蛋白、細胞以及組織水平實驗的完整檢測體系。
?
我們可提供從樣本運輸、儲存管理、樣本制備、樣本檢測到檢測數據分析的全流程服務。憑借嚴格的實驗室管理流程、標準化實驗室操作、原始數據儲存體系以及實驗項目管理系統(tǒng)，已經為超過3000家客戶單位提供服務，年檢測樣本超過100萬，受到了廣大客戶的信任與支持。
