科研必看｜蛋白組覆蓋不足？【阿拉丁】多酶消化策略破局指南

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重組胰蛋白酶 來源于人

616.90 2024-04-17

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? ? ? ? 在自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)中，酶切是決定肽段質(zhì)量、質(zhì)譜可檢測(cè)性與覆蓋深度的關(guān)鍵步驟。單一酶切在肽段覆蓋范圍上存在一定局限。

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? ? ? ? 阿拉丁結(jié)合已有研究文獻(xiàn)與實(shí)驗(yàn)實(shí)踐，整理多酶消化策略與蛋白質(zhì)組學(xué)覆蓋度優(yōu)化框架，為科研提供系統(tǒng)思路與參考方案。

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01、核心邏輯：互補(bǔ)酶切提升覆蓋度

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? ? ? ? 多酶消化利用不同蛋白酶的切割偏好互補(bǔ)，構(gòu)建更全面肽段集合，彌補(bǔ)單酶盲區(qū)，優(yōu)化肽段特性，提升蛋白質(zhì)組覆蓋度與鑒定穩(wěn)定性。

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02、三種常用多酶消化策略

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平行消化：同一樣本分份后用多酶獨(dú)立消化，結(jié)果清晰易對(duì)比，適合低豐度蛋白與廣譜覆蓋。

串聯(lián)消化：先預(yù)切后精切，釋放遮蔽序列，適配高分子量、難溶及膜蛋白樣本。

復(fù)合消化：多酶同體系反應(yīng)，流程相對(duì)簡(jiǎn)化，樣本損耗較低，需控制酶活兼容條件。

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03、常用酶組合

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胰蛋白酶 + 適配酶：穩(wěn)定性強(qiáng)，適用于深度蛋白質(zhì)組學(xué)研究場(chǎng)景

胰蛋白酶 + 酸性切割酶：改善酸性區(qū)域與修飾位點(diǎn)覆蓋

胰蛋白酶 + 疏水切割酶：提升疏水 / 跨膜蛋白檢出率

胰蛋白酶 + 邊界導(dǎo)向酶：優(yōu)化序列邊界與連接區(qū)覆蓋

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04、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵優(yōu)化要點(diǎn)

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樣本前處理：變性、還原、烷基化，充分暴露酶切位點(diǎn)

酶切條件：控制酶底比、時(shí)間、pH 與離子強(qiáng)度，減少非特異切割

肽段處理：優(yōu)化脫鹽分級(jí)，提高回收效率，保障質(zhì)譜檢測(cè)

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05、阿拉丁助力蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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? ? ? ? 阿拉丁提供質(zhì)譜級(jí)核心酶制劑及配套前處理試劑，純度高、特異性強(qiáng)、批次間一致性通過質(zhì)譜驗(yàn)證，適用于多酶消化與蛋白組覆蓋優(yōu)化流程。

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? ? ? ?合理運(yùn)用多酶消化策略，有助于拓展單酶消化所不及的肽段覆蓋范圍，為提升蛋白鑒定深度與序列完整性創(chuàng)造有利條件，阿拉丁與科研同行一路相伴。

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產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

級(jí)別和純度

R1456327

快速胰蛋白酶（質(zhì)譜級(jí)）

無動(dòng)物源，無載體，EnzymoPure?，重組，質(zhì)譜級(jí)（MS），≥95%(SDS-PAGE)，≥3800USP U/mg protein

S141078

重組胰蛋白酶

EnzymoPure?，用于蛋白測(cè)序，質(zhì)譜級(jí)（MS），≥4500 units/mg

E382042

蛋白內(nèi)切酶Lys-C

EnzymoPure?，重組，≥3.0AU/mg protein

C331618

胰凝乳蛋白酶底物II，發(fā)熒光

≥98%

rp155400

重組谷氨酰內(nèi)肽酶

無動(dòng)物源，無載體，生物活性，ActiBioPure?，高性能，EnzymoPure?，≥95%(SDS-PAGE)，≥5.0 AU/mg

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