?小腸位于腹中,上端接幽門與胃相通,下端通過闌門與大腸相連。小腸與心互為表里。是食物消化吸收的主要場所,盤曲于腹腔內(nèi),上連胃幽門,下接盲腸,全長約5-6米,張開有半個籃球大,分為十二指腸、空腸和回腸三部分。其管壁由黏膜,黏膜下層,肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞,黏膜有許多絨毛,絨毛根部的上皮下陷至固有層,形成管狀的腸腺,其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切。
細胞鑒定:細胞角蛋白-19(CK-19)免疫熒光染色為陽性。
、細胞傳代:如細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),步驟如下:
1) 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次;
2) 加1-2mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置培養(yǎng)箱中消化 1-2min ,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化;
3) 輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出至離心管中,1000 rpm離心5-8min,棄去上清液,補加1-2mL完全培養(yǎng)基后吹勻;
4) 按5-6mL每瓶補加完全培養(yǎng)基,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培養(yǎng)基的6cm培養(yǎng)皿中或者T25培養(yǎng)瓶中。
(即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養(yǎng)皿)
b、細胞凍存:細胞收集參照傳代步驟,按凍存數(shù)量(推薦每支凍存管5×106左右細胞數(shù)量凍存),加入1ml的我司無血清凍存液(貨號:C7001),輕輕混勻后,放-80℃冰箱,24小時后轉(zhuǎn)入液氮罐中。
C、細胞復蘇:從液氮灌或-80℃冰箱中找到需要復蘇的細胞,水浴鍋提前打開預熱37℃。
1) 將凍存細胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍;
2) 將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm離心5min;
3) 棄去上清液,補加5mL完全培養(yǎng)基后吹勻,接種于T25培養(yǎng)瓶中或6cm皿中,培養(yǎng)過夜,第二天換液并檢查細胞密度。
四、注意事項:有些細胞貼壁不牢,在運輸過程中細胞容易脫落,這是正?,F(xiàn)象。如脫落較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5-8min,收集上清作過渡培養(yǎng),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代,補充新的完全培養(yǎng)基至5-6ml/瓶,最后放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
三、售后條款:
1)細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么?
1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā);
2. 細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果,核實后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,(需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā);
6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。
2)細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1.?客戶造成細胞污染,不重發(fā);
2.?客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3.?非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4.?細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5.?細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6.?細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
7.?視具體情況而定。?