eCF506（又稱NXP900，CAS號(hào)1914078-41-3）是一種基于吡唑并嘧啶骨架的高選擇性SRC家族激酶抑制劑，對SRC的IC??低于0.5 nM，對ABL的選擇性差異超過950倍[1]。與傳統(tǒng)SRC/ABL雙靶點(diǎn)抑制劑不同，eCF506采用獨(dú)特的構(gòu)象選擇性抑制機(jī)制——將SRC鎖定在其天然無活性的"閉合"構(gòu)象，同時(shí)阻斷激酶催化活性和支架蛋白復(fù)合物形成功能[2]。該化合物具有口服生物利用度，目前已以NXP900代號(hào)進(jìn)入臨床I期試驗(yàn)，用于晚期實(shí)體瘤的治療評估[5]。
產(chǎn)品核心信息
eCF506的核心技術(shù)參數(shù)如下：
eCF506化學(xué)結(jié)構(gòu)式
eCF506在DMSO中具有較好的溶解度，但水溶性極低，體內(nèi)給藥時(shí)可采用CMC-Na混懸液或
5%DMSO/40%PEG300/5%Tween80/50%ddH?O的配方體系。瀚香生物建議科研人員使用新開封的DMSO配制儲(chǔ)備液，避免吸濕影響溶解度。
作用機(jī)制與核心優(yōu)勢
獨(dú)特的構(gòu)象選擇性抑制機(jī)制
SRC是一種非受體酪氨酸激酶，在細(xì)胞中以"閉合"（無活性）和"開放"（活性）兩種構(gòu)象動(dòng)態(tài)存在。當(dāng)SRC處于開放構(gòu)象時(shí)，其SH2和SH3結(jié)構(gòu)域釋放，可與其他蛋白（如FAK，局灶黏附激酶）形成復(fù)合物，驅(qū)動(dòng)下游信號(hào)傳導(dǎo)[2]。
現(xiàn)有臨床SRC抑制劑（如達(dá)沙替尼、博舒替尼、沙卡替尼）均屬于I型抑制劑，它們將SRC鎖定在活性開放構(gòu)象。這帶來一個(gè)矛盾：雖然催化活性被阻斷了，但SRC的SH2/SH3結(jié)構(gòu)域暴露在外，反而促進(jìn)了SRC與FAK等信號(hào)伙伴的組裝。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，達(dá)沙替尼處理后SRC-FAK復(fù)合物水平增加了3倍[2]。
eCF506采用了截然不同的策略——它屬于I.5型抑制劑，將SRC鎖定在天然失活閉合構(gòu)象。在這個(gè)狀態(tài)下，SH2和SH3結(jié)構(gòu)域與激酶結(jié)構(gòu)域相互作用形成緊密結(jié)構(gòu)，物理上阻斷了與大分子蛋白的接觸。共結(jié)晶結(jié)構(gòu)（PDB: 7NG7）顯示，eCF506結(jié)合后SRC的C-螺旋外移，K298-E313鹽橋（活性激酶的標(biāo)志）未形成，與天然自抑制狀態(tài)的SRC高度一致[2]。
流體力學(xué)半徑測定進(jìn)一步驗(yàn)證了這一機(jī)制：達(dá)沙替尼使SRC結(jié)構(gòu)"打開"，而eCF506維持SRC在更緊湊的構(gòu)象，類似未結(jié)合配體的SRC。熱位移實(shí)驗(yàn)也顯示兩者對SRC表觀熔解溫度產(chǎn)生相反方向的影響[2]。
雙功能阻斷：催化+支架
因?yàn)殚]合構(gòu)象的SRC無法暴露SH2/SH3結(jié)構(gòu)域，eCF506在抑制激酶催化活性的同時(shí)，也阻斷了SRC的支架蛋白功能。共免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，eCF506處理后FAK與SRC的復(fù)合物水平降低50% ，而達(dá)沙替尼則使該復(fù)合物增加3倍。博舒替尼和沙卡替尼同樣促進(jìn)SRC-FAK結(jié)合[2]。
這種雙功能阻斷帶來了FAK-Y397磷酸化的差異調(diào)控：達(dá)沙替尼濃度依賴性地增加FAK-Y397磷酸化，而eCF506則降低該位點(diǎn)磷酸化。在SYF細(xì)胞（缺乏SRC、YES、FYN的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）中，兩種抑制劑均不影響FAK-Y397磷酸化，排除了直接抑制FAK的可能性[2]。
激酶組范圍的高選擇性
在340種野生型蛋白激酶的酶抑制篩選中（1 μM濃度），eCF506僅使25種激酶活性降至50%以下，其中SRC是抑制程度較高的靶點(diǎn)（殘余活性0.1%）。9個(gè)命中靶點(diǎn)屬于SRC家族。相比之下，達(dá)沙替尼在半數(shù)濃度下命中51種激酶，博舒替尼命中85種激酶[2]。
eCF506對SRC家族關(guān)鍵成員的抑制活性：
SRC與ABL之間超過950倍的活性差異是eCF506區(qū)別于現(xiàn)有臨床抑制劑的核心優(yōu)勢。達(dá)沙替尼和博舒替尼均同時(shí)強(qiáng)效抑制ABL（殘余活性分別為2.8%和1.8%），而eCF506處理后ABL仍有56%活性[2]。這種選擇性差異可能解釋了eCF506更好的安全性表現(xiàn)。
與臨床SRC抑制劑的對比
研究歷程
eCF506的研發(fā)始于愛丁堡大學(xué)Asier Unciti-Broceta團(tuán)隊(duì)與Valeri Brunton、Neil Carragher等合作者的共同努力。2016年，F(xiàn)raser等人在《Journal of Medicinal Chemistry》上報(bào)道了通過快速發(fā)現(xiàn)和構(gòu)效關(guān)系研究，從吡唑并[3,4-d]嘧啶骨架出發(fā)，獲得了一系列高效抑制乳腺癌細(xì)胞生長且對ABL具有優(yōu)異選擇性的SRC激酶抑制劑[1]。eCF506即為該系列中活性較優(yōu)的化合物（文中編號(hào)11a）。
2021年，Temps等人在《Cancer Research》上系統(tǒng)闡明了eCF506的構(gòu)象選擇性抑制機(jī)制，通過共結(jié)晶結(jié)構(gòu)、生物物理表征和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，證明鎖定SRC閉合構(gòu)象可同時(shí)抑制催化和支架功能，并在同基因小鼠模型中顯示出優(yōu)于達(dá)沙替尼的抗腫瘤效果和耐受性[2]。
隨后，eCF506以NXP900的代號(hào)授權(quán)給Nuvectis Pharma公司進(jìn)行臨床開發(fā)。2023年，Dash等人在食管鱗癌模型中驗(yàn)證了NXP900的臨床前療效，發(fā)現(xiàn)其可強(qiáng)效抑制YAP1核定位并誘導(dǎo)腫瘤消退[3]。2024年AACR年會(huì)上公布的數(shù)據(jù)顯示，NXP900在ALK和EGFR抑制劑耐藥的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中也表現(xiàn)出強(qiáng)效增殖抑制[4]。2025年4月，F(xiàn)alchook等人在AACR年會(huì)上報(bào)告了NXP900的首個(gè)人體I期臨床試驗(yàn)結(jié)果：在26例晚期實(shí)體瘤患者中，20-200 mg/天的劑量范圍內(nèi)表現(xiàn)出可接受的安全性和劑量比例的藥代動(dòng)力學(xué)特征[5]。
制備方法與路線
eCF506的合成以吡唑并[3,4-d]嘧啶為核心骨架，主要合成路線如下[1]：
第一步：吡唑并嘧啶環(huán)的構(gòu)建。 以5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈為起始原料，與甲酰胺在微波輻射下180°C反應(yīng)2小時(shí)，環(huán)化生成1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，收率93%。
第二步：碘化反應(yīng)。 將上述產(chǎn)物懸浮于DMF中，加入N-碘代丁二酰亞胺（1.2當(dāng)量），微波180°C反應(yīng)40分鐘，得到3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，收率73%。
第三步：N-烷基化。 在DMF中以NaH為堿，將碘化產(chǎn)物與溴代乙醛二乙縮醛反應(yīng)，微波150°C反應(yīng)40分鐘，在N1位引入含氧保護(hù)基的乙基側(cè)鏈，收率64%。
第四步：Suzuki偶聯(lián)。 將N-烷基化中間體與硼酸酯在鈀催化下進(jìn)行Suzuki交叉偶聯(lián)，引入芳基取代基。
第五步：側(cè)鏈置換與脫保護(hù)。 最終通過側(cè)鏈胺置換反應(yīng)引入4-(二甲基氨基)哌啶基團(tuán)，并完成Boc保護(hù)基和甲氧基的安裝，得到目標(biāo)化合物eCF506。
整個(gè)合成路線的關(guān)鍵在于吡唑并嘧啶骨架的構(gòu)建和C-3位芳基的Suzuki偶聯(lián)引入，這為后續(xù)的構(gòu)效關(guān)系優(yōu)化提供了靈活的化學(xué)空間。
行業(yè)前景與應(yīng)用用途
SRC家族激酶與腫瘤
SRC是首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的致癌基因產(chǎn)物，SRC家族激酶（包括SRC、YES、FYN、LCK、LYN、HCK、BLK等9個(gè)成員）在細(xì)胞黏附、侵襲、增殖、存活和血管生成中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在正常細(xì)胞中，SFK主要處于失活狀態(tài)；而在腫瘤組織中，SFK被高度激活[5]。
SFK的異常激活與多種腫瘤密切相關(guān)，包括乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、前列腺癌等。尤其在三陰性乳腺癌和雌激素受體陽性乳腺癌中，SRC的驅(qū)動(dòng)作用更為顯著。臨床數(shù)據(jù)顯示，eCF506對三陰性和ER+乳腺癌細(xì)胞系的GI??值低至0.015-0.22 μM[2]。
克服耐藥的潛力
近年來，SFK激活被發(fā)現(xiàn)在多種靶向藥物的獲得性耐藥中扮演重要角色。在EGFR突變非小細(xì)胞肺癌中，SFK/FAK信號(hào)通路的代償性激活削弱了奧希替尼的療效；在ALK陽性肺癌中，alectinib耐藥同樣伴隨SRC/FAK和YAP1通路的激活[4]。
NXP900在臨床前研究中展現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)耐藥的潛力：與奧希替尼聯(lián)用時(shí)，PC9-OR1耐藥細(xì)胞系的GI??從1,508 nM降至121 nM；與alectinib聯(lián)用時(shí)，NCI-H2228-ALR1耐藥細(xì)胞系的增殖抑制也得到恢復(fù)[4]。這為eCF506在聯(lián)合治療中的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。
臨床研究進(jìn)展
NXP900-101研究（NCT05873686）是一項(xiàng)首個(gè)人體I期劑量遞增和擴(kuò)展臨床試驗(yàn)，納入26例晚期實(shí)體瘤患者。中位年齡61歲，65%為男性，既往抗腫瘤治療中位線數(shù)為5線。劑量范圍20-200 mg/天口服給藥[5]。
安全性方面，常見治療期不良事件多為1-2級(jí)，包括乏力（42%）、腹瀉（35%）、惡心（31%）和呼吸困難（23%）。藥代動(dòng)力學(xué)分析顯示，200 mg單次口服給藥后中位達(dá)峰時(shí)間約3小時(shí)，末端半衰期約12小時(shí)，多次給藥后出現(xiàn)中度蓄積。藥效學(xué)分析證實(shí)，NXP900在臨床相關(guān)劑量下可有效抑制外周血單核細(xì)胞中SRC的磷酸化[5]。
上下游與靶點(diǎn)總體情況
SRC信號(hào)通路上下游
SRC處于多條信號(hào)通路的交匯節(jié)點(diǎn)：
上游激活因子：整合素、生長因子受體（EGFR、PDGFR、VEGFR）、G蛋白偶聯(lián)受體等，均可通過不同機(jī)制激活SRC。
下游底物：FAK、p130CAS、paxillin、p190RhoGAP、Shc、Stat3等。其中FAK是SRC較關(guān)鍵的相互作用伙伴，SRC通過磷酸化FAK的Y576/577、Y861、Y925等位點(diǎn)，調(diào)控細(xì)胞黏附和遷移。
支架功能：SRC作為支架蛋白，通過SH2/SH3結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)蛋白-蛋白相互作用，組裝信號(hào)復(fù)合物。eCF506的獨(dú)特之處正在于同時(shí)阻斷SRC的催化和支架功能。
SRC抑制劑研發(fā)格局
目前已獲批或進(jìn)入臨床的SRC抑制劑多為多靶點(diǎn)藥物，如達(dá)沙替尼（SRC/ABL雙抑制，已獲批CML）、博舒替尼（SRC/ABL雙抑制）、沙卡替尼（SRC/ABL）等。這些藥物因同時(shí)抑制ABL而具有血液學(xué)毒性，且因激酶譜廣泛導(dǎo)致脫靶效應(yīng)。
eCF506（NXP900） 作為目前公開報(bào)道中少有的SRC選擇性構(gòu)象抑制劑，通過鎖定閉合構(gòu)象實(shí)現(xiàn)雙功能阻斷，在安全性上展現(xiàn)出差異化優(yōu)勢：在同基因小鼠模型中，eCF506治療組未觀察到達(dá)沙替尼常見的心臟毒性，脾臟和心臟重量指標(biāo)均優(yōu)于達(dá)沙替尼組[2]。在非癌性乳腺上皮細(xì)胞MCF10A中，eCF506的EC??超過10 μM，而達(dá)沙替尼在低微摩爾濃度即可降低50%以上的細(xì)胞活力[2]。
常見問題FAQ
Q：eCF506與達(dá)沙替尼的核心區(qū)別是什么？
eCF506將SRC鎖定在天然失活閉合構(gòu)象（I.5型抑制），同時(shí)阻斷催化和支架功能；達(dá)沙替尼將SRC鎖定在活性開放構(gòu)象（I型抑制），僅阻斷催化活性，反而促進(jìn)SRC與FAK等信號(hào)伙伴的組裝。此外，eCF506對ABL的選擇性差異超過950倍，遠(yuǎn)低于達(dá)沙替尼的ABL抑制活性。
Q：eCF506是否已進(jìn)入臨床？
是的，eCF506以NXP900為代號(hào)，由Nuvectis Pharma推進(jìn)臨床開發(fā)。I期臨床試驗(yàn)（NCT05873686）已在晚期實(shí)體瘤患者中完成劑量遞增階段，20-200 mg/天劑量下顯示出可接受的安全性和生物活性[5]。
Q：eCF506的口服生物利用度如何？
eCF506的口服生物利用度為25.3%，屬于中等水平[1]。在I期臨床試驗(yàn)中，200 mg單次給藥后半衰期約12小時(shí)，支持每日一次或兩次口服給藥方案[5]。
Q：eCF506在哪些腫瘤類型中表現(xiàn)出活性？
臨床前研究顯示，eCF506在三陰性乳腺癌、ER+乳腺癌、食管鱗癌、結(jié)直腸癌等模型中均有活性。在ALK或EGFR抑制劑耐藥的非小細(xì)胞肺癌中，NXP900聯(lián)合用藥也顯示出逆轉(zhuǎn)耐藥的潛力[2][4]。瀚香生物提醒，以上均為臨床前數(shù)據(jù)，臨床療效尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。
Q：eCF506的溶解性如何？實(shí)驗(yàn)中有何建議？
eCF506在DMSO中溶解度較好（62.5-100 mg/mL），在水中幾乎不溶。建議使用新開封的無水DMSO配制儲(chǔ)備液，避免吸濕影響溶解度。儲(chǔ)備液可在-80°C分裝保存，避免反復(fù)凍融。
參考文獻(xiàn)
[1] Fraser C, Dawson JC, Dowling R, et al. Rapid Discovery and Structure-Activity Relationships of Pyrazolopyrimidines That Potently Suppress Breast Cancer Cell Growth via SRC Kinase Inhibition with Exceptional Selectivity over ABL Kinase. J Med Chem. 2016;59(10):4697-4710.
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[4] Carragher NO, et al. NXP900, a novel YES1/SRC Kinase Inhibitor in Phase 1, Demonstrates Potent Inhibition of Proliferation in Cell Lines Resistant to ALK and EGFR Inhibitors. AACR Annual Meeting 2024, Abstract 35119.
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風(fēng)險(xiǎn)提示與實(shí)驗(yàn)注意
● 藥理風(fēng)險(xiǎn)：eCF506為SRC家族激酶選擇性抑制劑，對ABL等非靶激酶仍有一定抑制活性（IC??=479 nM），實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中需關(guān)注脫靶效應(yīng)。
● 實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)：eCF506水溶性極低，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)需注意制劑配方的選擇和穩(wěn)定性?？诜锢枚燃s25%，給藥方案需根據(jù)PK數(shù)據(jù)合理設(shè)計(jì)。
● 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：DMSO儲(chǔ)備液建議分裝保存于-80°C，避免反復(fù)凍融。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中DMSO終濃度建議不超過0.1%。eCF506對不同乳腺癌亞型的敏感性差異較大，HER2+細(xì)胞株可能不敏感，需根據(jù)研究目的選擇合適細(xì)胞系。
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