一?、產(chǎn)品詳情
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細(xì)胞鑒定:PCR,測(cè)序
質(zhì)量檢測(cè):細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性
修飾類型:敲除
轉(zhuǎn)導(dǎo)方法:蛋白法
抗性基因:—
克隆類型:純合子
細(xì)胞凍存或復(fù)蘇發(fā)貨
本庫的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
收到細(xì)胞后請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀產(chǎn)品資料,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性 (貼壁/懸浮/半貼壁半懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)體系、傳代比例和換液頻率等。
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二、 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
穩(wěn)定表達(dá),數(shù)據(jù)可靠:?目標(biāo)基因穩(wěn)定整合至基因組,避免外源基因丟失,確保蛋白表達(dá)穩(wěn)定可靠,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)性高。
背景清晰,干擾少:?經(jīng)過嚴(yán)格的篩選和驗(yàn)證,確保細(xì)胞株背景清晰,內(nèi)源性干擾因素少,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確。
種類豐富,選擇多樣:?提供多種宿主細(xì)胞(如HEK293、CHO、HeLa等)和靶基因(如熒光蛋白、報(bào)告基因、功能基因等)組合,滿足您不同的研究需求。
嚴(yán)格質(zhì)檢,品質(zhì)保證:?每株細(xì)胞均經(jīng)過嚴(yán)格的支原體檢測(cè)、STR鑒定和功能驗(yàn)證,確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
專業(yè)服務(wù),全程支持:?可根據(jù)客戶需求定制特定基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)株,提供完善的售前咨詢、售后技術(shù)支持和服務(wù),為您的研究保駕護(hù)航。
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三、細(xì)胞株可廣泛應(yīng)用于以下研究領(lǐng)域:
基因功能研究:?過表達(dá)或敲低目標(biāo)基因,研究其功能及調(diào)控機(jī)制。
藥物篩選與評(píng)價(jià):?構(gòu)建藥物靶點(diǎn)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,用于高通量藥物篩選和藥效評(píng)價(jià)。
蛋白表達(dá)與純化:?高效表達(dá)目標(biāo)蛋白,用于蛋白結(jié)構(gòu)、功能研究和藥物開發(fā)。
疾病模型構(gòu)建:?構(gòu)建疾病相關(guān)基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,用于疾病機(jī)制研究和藥物開發(fā)。
操作步驟
細(xì)胞培養(yǎng):使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和條件培養(yǎng)宿主細(xì)胞,確保細(xì)胞處于最佳生長狀態(tài)。
轉(zhuǎn)染:將含有目標(biāo)基因的載體通過轉(zhuǎn)染試劑(如Lipofectamine)導(dǎo)入宿主細(xì)胞。根據(jù)載體類型選擇合適的轉(zhuǎn)染方法(如化學(xué)轉(zhuǎn)染、電穿孔等)。
篩選:轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí),加入篩選藥物(如G418、Puromycin等)進(jìn)行篩選。持續(xù)篩選2-3周,直至未轉(zhuǎn)染細(xì)胞全部死亡。
單克隆篩選:將存活的細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋,接種到96孔板中,培養(yǎng)至單克隆形成。挑選高表達(dá)目標(biāo)蛋白的單克隆進(jìn)行擴(kuò)增。
驗(yàn)證:通過PCR、Western Blot等方法驗(yàn)證目標(biāo)基因的整合和表達(dá)。檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平和功能活性。
凍存:將驗(yàn)證后的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞進(jìn)行凍存,建立細(xì)胞庫。
載體信息:
載體類型: 質(zhì)粒、慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等。
篩選標(biāo)記: G418、Puromycin、Hygromycin等。
啟動(dòng)子: CMV、EF1α、SV40等。
篩選藥物濃度:
G418: 200-1000 μg/mL
Puromycin: 1-10 μg/mL
Hygromycin: 50-500 μg/mL
注意事項(xiàng)
細(xì)胞狀態(tài): 確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前處于最佳生長狀態(tài),避免使用老化或污染的細(xì)胞。
轉(zhuǎn)染效率: 不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率差異較大,需優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
篩選藥物: 篩選藥物的濃度需根據(jù)細(xì)胞系和載體進(jìn)行優(yōu)化,避免過度篩選導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
單克隆篩選: 單克隆篩選是獲得高表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株的關(guān)鍵步驟,需耐心細(xì)致操作。
凍存與復(fù)蘇: 凍存和復(fù)蘇過程中需嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間,避免細(xì)胞損傷。
四、 訂購信息
雅吉生物產(chǎn)品全部優(yōu)惠價(jià)供應(yīng),京津冀、江浙滬皖、川渝地區(qū)通常到貨時(shí)間為次日達(dá)。其它主要大中城市到貨時(shí)間為隔日達(dá)(周末和節(jié)假日除外)。
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五、 聯(lián)系我們
歡迎在線、電話、郵件(yajikit@163.com)、QQ或微信訂購!訂貨熱線:021-34661275或15317085058(微信同步)
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六、 免責(zé)聲明
產(chǎn)品僅用于科研用途,不得用于臨床診斷或治療。
七、 常見問題解答
Q1: 如何選擇合適的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株?
A1: 選擇穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株需要考慮以下因素:
研究目的:明確您的研究目的,例如基因功能研究、藥物篩選等。
宿主細(xì)胞:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的宿主細(xì)胞,例如HEK293細(xì)胞適合蛋白表達(dá),CHO細(xì)胞適合抗體生產(chǎn)。
靶基因:選擇您感興趣的靶基因,并確保其與宿主細(xì)胞兼容。
抗性標(biāo)記:選擇與您實(shí)驗(yàn)體系兼容的抗性標(biāo)記,例如G418、Puromycin等。
Q2: 如何驗(yàn)證穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的表達(dá)?
A2: 可以通過以下方法驗(yàn)證穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的表達(dá):
Western Blot:檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。
qPCR:檢測(cè)目標(biāo)基因的mRNA表達(dá)水平。
熒光顯微鏡觀察:如果目標(biāo)蛋白帶有熒光標(biāo)記,可以直接觀察熒光表達(dá)情況。
Q3: 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株可以傳代多少次?
A3: 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的傳代次數(shù)取決于細(xì)胞類型、培養(yǎng)條件等因素。一般來說,穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株可以穩(wěn)定傳代20-30代。
[雅吉生物]致力于為您提供高質(zhì)量的科研工具和服務(wù),助力您的研究取得成功!