一、產(chǎn)品概述
ReadiUse? 預(yù)活化HRP NHS酯是辣根過氧化物酶（HRP）的單NHS酯衍生物，專為含伯胺基團(tuán)的生物分子如抗體，蛋白等提供簡便高效的偶聯(lián)方案。ReadiUse? 預(yù)活化HRP NHS酯由艾美捷代理AAT Bioquest推出，貨號：AAT-11025，已預(yù)先完成活化處理，用戶無需自行進(jìn)行酶活化或復(fù)雜的化學(xué)修飾步驟，僅需簡單混合即可完成抗體與HRP的共價(jià)偶聯(lián)。
二、核心性能優(yōu)勢
操作極簡：將抗體堿性溶液（pH 8.5-9.0）直接與HRP NHS酯混合，室溫振蕩孵育1-2小時(shí)即可完成偶聯(lián)反應(yīng)。無需透析，脫鹽或春華步驟，反應(yīng)液大多可直接用于elisa檢測。
適用濃度范圍寬：任何濃度高于1 mg/mL的抗體均可直接與預(yù)活化HRP NHS酯進(jìn)行偶聯(lián)，無需預(yù)先調(diào)整濃度。
結(jié)果可靠：該方法提供了最穩(wěn)定的抗體-HRP偶聯(lián)途徑，批次間差異小，有效避免了傳統(tǒng)偶聯(lián)方法中活化效率不穩(wěn)定導(dǎo)致的標(biāo)記效果波動(dòng)。
三、操作流程
3.1 標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)步驟
1. 取約100 μg抗體（IgG），溶于20 ~ 50 μL 25 mM碳酸氫鈉緩沖液（pH 8.5）中；
2. 將抗體溶液轉(zhuǎn)移至HRP NHS酯小管中，充分混勻；
3. 室溫反應(yīng)1 ~ 2小時(shí)，建議伴隨輕柔振蕩；
4. 加入等體積100 mM Tris-HCl緩沖液（pH 7.5）+ 0.5% BSA，終止反應(yīng)；
5. 反應(yīng)混合物于4℃保存，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3.2 注意事項(xiàng)
干擾因素?| 處理方式
疊氮化鈉（NaN?） | 需提前去除，否則會(huì)抑制HRP活性
Tris緩沖液及其他含胺化合物 | 需更換為不含胺的緩沖體系，否則競爭消耗NHS酯
樣品中其他蛋白（如BSA） | 需預(yù)先純化目標(biāo)蛋白，避免競爭標(biāo)記
?
四、應(yīng)用建議與質(zhì)量保證
直接使用場景：大多數(shù)情況下，反應(yīng)結(jié)束后加入含BSA的終止緩沖液即可直接用于elisa檢測，無需進(jìn)一步純化。BSA在此處既作為封閉蛋白減少非特異性結(jié)合，也起到穩(wěn)定HRP-抗體偶聯(lián)物的作用。
產(chǎn)品合規(guī)說明：本產(chǎn)品僅供研究使用，不得用于臨床診斷。操作過程中如需處理潛在危險(xiǎn)化學(xué)品，請查閱產(chǎn)品附帶的安全數(shù)據(jù)表（SDS）。未經(jīng)AAT Bioquest書面許可，嚴(yán)禁對試劑盒或其組分進(jìn)行化學(xué)分析或反向工程。
五、常見問題與解決方案
1、標(biāo)記效率低→確認(rèn)抗體濃度是否≥1mg/mL；檢測緩沖液中是否含Tris，甘氨酸等胺類化合物，確保無疊氮鈉存在。
2、elisa背景高→檢查密封條件是否充分，適量增加BSA濃度或延長封閉時(shí)間。
3、偶聯(lián)物活性下降→避免反復(fù)凍融，建議分裝后于4℃短期保存或加入等量甘油于-20℃長期保存。
六、總結(jié)
ReadiUse? 預(yù)活化HRP NHS酯以即用型預(yù)活化設(shè)計(jì)為核心優(yōu)勢，將抗體-HRP偶聯(lián)從多步復(fù)雜操作簡化為一步混合反應(yīng)。無需純化步驟即可獲得直接用于elisa的偶聯(lián)產(chǎn)物，大幅節(jié)約了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和操作成本。對于需要批間一致性的常規(guī)免疫檢測或高通量篩選項(xiàng)目，該產(chǎn)品提供了一套可靠，高效的標(biāo)準(zhǔn)化偶聯(lián)解決方案。