? ? ? ? ? ? ?阿莫西林快速檢測試劑盒
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（血液）使用說明書
【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物阿莫西林類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭阿莫西林類藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物阿莫西林類藥物的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)殘留物阿莫西林類藥物的含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】 ??
規(guī) ?????格：96孔/盒
靈 敏 度：?0.1ppb
檢測時間：45min
樣本定量檢測下限：??
血???液………………………………………2ppb
樣本回收率
血???液…………………………………80±15%
反應(yīng)率：
阿莫西林……………………………………………100%?
【試劑盒組成】
1、?微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、?標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、?酶標(biāo)記物 ??????7ml………………………紅色帽
4、?200×濃縮受體 50ul……………………離心管
5、?抗體工作液 ??7ml ………………………紅色帽
6、?底物A液 ?????7ml ………………………棕色帽
7、?底物B液 ????7ml ?…………………… 黑色帽
8、?終 ?止 ?液 ????7ml ?…………………… 黃色帽
9、?20×濃縮洗滌液40 ml ?……………… 白色帽
10、?2× 濃縮復(fù)溶液 ?50ml ·………………???藍(lán)色帽
11、?蓋板膜……………………………………1張
12、?說明書 ……………………………………1份
【所用儀器、試劑】 ??
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20μl-200μl、100μl-1000μl，多道250μl
試 ????????劑：去離子水
【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】
樣本處理前需配制：
配液1、1×復(fù)溶液：
????????????????將2×濃縮復(fù)溶液用去離子水以1：1稀釋（1份1×濃縮復(fù)溶液+1份去離子水），用于樣本提取和稀釋。
配液2、將40ml濃縮洗滌液（10倍濃縮）用去離子水按照 1：9稀釋（1份濃縮洗滌液+9份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
配液3?、受體工作液的配制：
取5ul的200X濃縮受體，加入1000ul配制好的1×復(fù)溶液混勻即可，或按所需用量配制抗體。
【樣本前處理方法】 ??
樣本前處理須知：處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、
禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理步驟
（a）血液樣本的處理
1、取出50μL血液+450μL的1×復(fù)溶液液混合30s；
2、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10倍?
【酶聯(lián)免疫檢測步驟】
1、?從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室?溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、?取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、?編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、?加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50μl/孔到各自的微孔中，然后加配制好的受體工作液50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕震蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
5、?取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl?/孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、?加入抗體工作液50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
7、?取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl?/孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
8、?顯色：每孔加入底物液A液50μl， 再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色10min。
9、?測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。
九、結(jié)果分析???
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含阿莫西林成負(fù)相關(guān)
1、粗略判定
?用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.310， 樣本2的吸光度值為0.820，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.510；0.1ppb為1.320；0.3ppb為1.030；0.9ppb為0.660； 2.7ppb為0.389；8.1ppb為0.198。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb-8.1ppb； 樣本2的濃度范圍是0.3 ppb-0.9 ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿莫西林實(shí)際濃度。
2、定量分析：
所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即：
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿莫西林實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。
3、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
??
阿莫西林(ppb)?[μg/kg]
圖1：阿莫西林檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
?%CV?
????????????0 ??????0.1?????0.3?????0.9?????2.7????8.1
??????????????????阿莫西林(ppb) [μg/kg]
???????????圖2：阿莫西林檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出阿莫西林檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)阿莫西林濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、?使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、?在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、?混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、?反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、?不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、?不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、?顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、?該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。